Escherichia coli O157: Pasgan lorgaidh searbhag niuclasach H7 (dòigh sgrùdaidh flùraiseach PCR)
Tuairisgeul Kit:
Cat.Chan eil.FP102
Tha e air a chleachdadh airson lorg agus sgrìonadh luath de E. coli O157:H7 ann am biadh, biadhadh, sampallan uisge agus sampallan àrainneachd.
Tuairisgeulan
Tha e air a chleachdadh airson lorg agus sgrìonadh luath de E. coli O157:H7 ann am biadh, biadhadh, sampallan uisge agus sampallan àrainneachd.
[Prionnsabal deuchainn]A rèir prionnsapal teicneòlas fluorescent PCR, tha primers sònraichte agus probes Taqman air an dealbhadh airson gine sònraichte Escherichia coli O157: H7, agus air an lorg le inneal fluorescent PCR, gus lorg Escherichia coli O157: H7 Lorg càileachdail DNA.
Susbaint Kit
Nota: Chan eil probe sianal ROX air a thoirt a-steach.
| Cluchd-dùbhlain | Sònrachadh | Qaonachd |
| Bufair A | Tiùb | 1 |
| Bufair B | Tiùb | 1 |
| Smachd adhartach | Tiùb | 1 |
| Smachd àicheil | Tiùb | 1 |
Cleachdadh ris a bheil dùil
Tha e air a chleachdadh airson lorg agus sgrìonadh luath de E. coli O157:H7 ann am biadh, biadhadh, sampallan uisge agus sampallan àrainneachd.
Suidheachadh stòraidh agus ceann-latha crìochnachaidh
Bùth aig -20 ℃ anns an dorchadas agus seachain reothadh is leaghadh.
Is e an ùine dligheachd 12mìosan, agus tha an ceann-latha toraidh air a nochdadh air a’ phacaid a-muigh.
Innealan agus stuthan consum
Ionnsramaid PCR cainneachdail fluorescent, gunna pìobaireachd agus molaidhean maidsidh, crathadh vortex, mion-centrifuge.
Cleachdadh
1. Pròiseas Eisimpleir
1.1 Seòrsa sampall: Tha am pasgan seo freagarrach airson biadh, biadhadh, sampallan uisge agus sampallan eile a tha fo amharas gu bheil iad air an truailleadh le Escherichia coli O157:H7.Airson toraidhean feòil air an giullachd gu domhainn, deochan agus stuthan eile anns a bheil pigmentan, feumar an roladh gus nach toir iad buaidh air cruinneachadh comharran flùraiseach.
1.2 Giullachd sampall: Thoir sùil air "GB 4789.10-2016 Sàbhailteachd Bidhe Nàiseanta Sgrùdadh Microbio-eòlasach Bidhe air Escherichia coli O157: Deuchainn H7" airson ullachadh sampall, cultar beairteachaidh agus iomallachd Escherichia coli O157: H7.
- Ntoirt a-mach searbhag ucleic
Gabh 20 mL de fhuasgladh beairteachaidh ann an tiùb centrifuge 1.5 mL, cuir 200 μL de lysate microbial (feumar pasgan a bharrachd), vortex airson 30 diogan, centrifuge goirid, agus cuir an dàrna taobh.
Beachdan: Bu chòir toirt a-mach searbhag niuclasach bhon lysate a chrìochnachadh taobh a-staigh 10 mionaidean, agus chan urrainnear a stòradh airson ùine mhòr.
3. Meudachadh Acid Nucleic
3.1 Tionndaidh air an ionnstramaid PCR cainneachdail fluorescent airson a chleachdadh.
Bufair A agus Buffer B bhon phasgan, leaghadh iad gu mionaideach, agus cuir a-steach centrifuge goirid.Cuir 18 μL Buffer A agus 2 μL Buffer B ri gach tiùb freagairt PCR.An uairsin cuir 5 mL gach aon de na smachd àicheil, searbhag niuclasach air a thoirt a-mach, agus smachd adhartach a-steach do phìoban freagairt PCR, cuir crìoch air na tiùban, agus centrifuge goirid.
3.3 Cuir thairis an tiùb ath-bhualadh PCR gu inneal PCR fluorescent, agus cleachd na modhan a leanas gus deuchainnean leudachaidh a dhèanamh: tagh 25 mL airson an t-siostam ath-bhualadh, cruinnich comharran fluorescence aig 60 ° C airson gach cearcall, agus tagh FAM airson an t-sianal lorgaidh.
| Ceum | Prògram | An àireamh de chuairtean |
| 1 | 37 ℃ 5 mionaidean | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60 ℃ 30s (cruinneachadh fluorescence) |
Stiùireadh airson duilgheadasan mion-sgrùdadh
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Chan urrainnear RNA a thoirt a-mach no tha toradh searbhag niuclasach ìosal
Mar as trice tha mòran fhactaran ann a bheir buaidh air èifeachdas ath-bheothachaidh, leithid: sampall susbaint RNA, dòigh-obrach, tomhas elution, msaa.
Mion-sgrùdadh air adhbharan cumanta:
1.Ice amar no ìosal-teòthachd (4 ° C) centrifugation rè obrachadh.
Moladh: Teòthachd an t-seòmair (15-25 ° C) obrachadh, gun a bhith a-riamh amar deigh agus centrifuge teòthachd ìosal.
2. Stòradh sampall neo-iomchaidh no stòradh sampall airson ro fhada.
Moladh: Glèidh sampallan aig -80 ° C no reothadh ann an naitridean leaghan, agus seachain cleachdadh reothadh is leaghaidh;feuch ri sampallan ùra a chleachdadh airson às-tharraing RNA.
3.Insufficient shampall lysis
Moladh: Dèan cinnteach gu bheil an sampall agus am fuasgladh obrach (Linear Acrylamide) air a mheasgachadh gu mionaideach agus air a ghintinn airson 10 mionaidean aig teòthachd an t-seòmair (15-25 ° C)
4.The eluent chaidh a chur ris ceàrr
Moladh: Dèan cinnteach gu bheil RNase-Free ddH2O air a chur ri meadhan membran a’ cholbh glanaidh
5.Improper tomhas-lìonaidh anhydrous ethanol ann Buffer viRW2
Moladh: Feuch an lean thu an stiùireadh, cuir an tomhas ceart de ethanol anhydrous gu Buffer viRW2 agus measgaich iad gu math mus cleachd thu am pasgan.
Cleachdadh sampall 6.Improper.
Moladh: 200µl de shampall gach 500μl de Buffer viRL.Mar thoradh air cus meud sampall thig ìre às-tharraing RNA nas ìsle.
7.Improper elution volume no neo-choileanta elution.
Moladh: Is e tomhas-lìonaidh a’ cholbh glanaidh 30-50μl;mura h-eil a’ bhuaidh elution riarachail, thathas a’ moladh ddH RNase-Free air a theasachadh a chur ris2O agus leudaich an ùine cur aig teòthachd an t-seòmair, leithid 5-10min
8.Purification colbh tha ethanol fuigheall an dèidh rinsing ann Buffer viRW2.
Moladh: Ma dh’ fhuiricheas ethanol às deidh dha a bhith a’ sruthadh ann am Buffer viRW2 agus centrifugation tiùb falamh airson 2min, faodar an colbh glanaidh fhàgail aig teòthachd an t-seòmair airson 5min às deidh centrifugation tiùb falamh gus an ethanol a tha air fhàgail a thoirt air falbh gu tur.
Milleadh air moileciuilean RNA fìor-ghlan
Tha càileachd an RNA fìor-ghlan co-cheangailte ri factaran leithid stòradh sampall, truailleadh RNase, agus obrachadh.
Mion-sgrùdadh air adhbharan cumanta:
1.Cha deach na sampallan cruinnichte a shàbhaladh ann an ùine.
Moladh: Mura tèid an sampall a chleachdadh ann an ùine às deidh a chruinneachadh, feuch an glèidh thu e aig -80 ℃ no nitrogen leaghaidh sa bhad.Airson moileciuilean RNA a thoirt a-mach, feuch ri sampallan a chaidh a chruinneachadh às ùr a chleachdadh nuair as urrainnear.
2.Bha sampaill cruinneachaidh a’ reothadh agus a’ leaghadh uair is uair.
Moladh: Seachain reothadh is leaghadh a-rithist (gun a bhith nas fhaide na aon uair) nuair a bhios tu a’ cruinneachadh agus a’ stòradh sampaill, air neo thèid toradh searbhag niuclasach sìos.
Chaidh 3.RNase a thoirt a-steach don t-seòmar obrachaidh no cha deach miotagan cuidhteasach, aghaidhean choimheach, msaa a chaitheamh.
Moladh: Tha e nas fheàrr toirt a-mach deuchainn mholacilean RNA ann an seòmar obrachaidh RNA air leth, agus tha am bòrd deuchainneach air a ghlanadh ron deuchainn.Caith miotagan agus aghaidhean choimheach tron deuchainn gus truailleadh RNA adhbhrachadh le ro-ràdh RNase a sheachnadh.
4.Tha an reagent air a thruailleadh le RNase rè cleachdadh.
Moladh: Cuir Kit Iomallach RNA Viral ùr na àite airson deuchainnean co-cheangailte.
5.An truailleadh RNase de na pìoban centrifuge, molaidhean pìobaireachd, msaa.
Thug na moileciuilean RNA fìor-ghlan buaidh air deuchainnean sìos an abhainn
Bheir na moileciuilean RNA a thèid a ghlanadh leis a’ cholbh glanaidh buaidh air deuchainnean sìos an abhainn ma tha cus ionsan salainn no pròtanan ann, leithid: tar-sgrìobhadh air ais, Northern Blot, msaa.
1.Tha ionsan salainn air fhàgail anns na moileciuilean RNA eluted.
Moladh: Dèan cinnteach gu bheil an tomhas ceart de ethanol anhydrous air a chur ri Buffer viRW2, agus nigh an colbh glanaidh dà uair a rèir an astar centrifugation ceart air an stiùireadh obrachaidh.An uairsin dèan centrifugation gus truailleadh ions salainn a thoirt air falbh chun na h-ìre as motha
2.Tha ethanol air fhàgail anns na moileciuilean RNA eluted
Moladh: aon uair ‘s gu bheil thu a’ dearbhadh gu bheil colbhan glanaidh air an nighe le Buffer viRW2, dèan centrifugation tiùb falamh a rèir an astar ceud-ghluasadach air an stiùireadh obrachaidh.Ma tha ethanol air fhàgail fhathast, faodar fhàgail airson 5 mionaidean aig teòthachd an t-seòmair às deidh centrifugation tiùb falamh gus an ethanol a tha air fhàgail a thoirt air falbh chun na h-ìre as motha.
Leabhar-làimhe stiùiridh:
Leabhar-làimhe stiùiridh Kit Iomallach RNA Viral
