duilleag_bratach

Cell Direct RT qPCR Kit - SYBR GREEN I

Tuairisgeul Kit:

◮ Simple agus èifeachdach: le teicneòlas Cell Direct RT, gheibhear sampallan RNA ann an dìreach 7 mionaidean.

Tha iarrtas sampall beag, cho ìosal ri 10 ceallan faodar a dhearbhadh.

◮ Cur-a-steach àrd: is urrainn dha RNA a lorg gu luath ann an ceallan air an àiteachadh ann an truinnsearan 384, 96, 24, 12, 6-tobar.

Faodaidh DNA Eraser genomes a chaidh a leigeil ma sgaoil a thoirt air falbh gu sgiobalta, a’ bhuaidh air toraidhean deuchainneach às deidh sin a lughdachadh gu mòr.

Tha siostam RT agus qPCR leasaichte a’ dèanamh an tar-sgrìobhadh cùil RT-PCR dà-cheum nas èifeachdaiche agus PCR nas mionaidiche, agus nas seasmhaiche ri luchd-bacadh freagairt RT-qPCR.

neart a sheachnadh


Mion-fhiosrachadh toraidh

Bathar Tags

Ceistean Cumanta

Tuairisgeulan

Bidh an uidheamachd seo a’ cleachdadh siostam bufair lysis gun samhail a dh’ fhaodas RNA a leigeil ma sgaoil gu sgiobalta bho shamhlaichean cealla cultarach airson ath-bheachdan RT-qPCR, agus mar sin a’ cur às don phròiseas glanaidh RNA a tha a’ caitheamh ùine agus a’ saothair.Gheibhear an teamplaid RNA ann an dìreach 7 mionaidean.An 5×Dìreach RT Mix agus 2×Faodaidh ath-bheachdan dìreach qPCR Mix-SYBR a bheir an uidheamachd seachad toraidhean PCR cainneachdail fìor-ùine fhaighinn gu luath agus gu h-èifeachdach.

5×Dìreach RT Mix agus 2×Tha fulangas dìon làidir aig qPCR Mix-SYBR dìreach, agus faodar lysate nan sampallan a chleachdadh mar theamplaid airson RT-qPCR gu dìreach.Anns a’ ghoireas seo tha an transcriptase cùil Foregene àrd-dàimh sònraichte RNA, agus DNA polymerase Hot D-Taq, dNTPs, MgCl2, bufair freagairt, optimizer PCR agus stàball.

Sònrachaidhean

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Co-phàirtean kit

Pàirt I

Bufair CL

Foregene Protease Plus II

Bufair ST

Pàirt II

inneal-sgrios DNA

5 × measgachadh RT dìreach

2 × Dìreach qPCR Mix-SYBR

Dath iomraidh 50 × ROX

RNase-Free ddH2O

Stiùiridhean

Feartan & buannachdan

Simple agus èifeachdach: le teicneòlas Cell Direct RT, gheibhear sampallan RNA ann an dìreach 7 mionaidean.

■ Tha iarrtas sampall beag, cho ìosal ri 10 ceallan faodar a dhearbhadh.

■ Treòrachadh àrd: lorgaidh e RNA gu luath ann an ceallan a tha air an àiteachadh ann an truinnsearan 384, 96, 24, 12, 6-tobar.

■ Faodaidh DNA Eraser genomes a chaidh a leigeil ma sgaoil a thoirt air falbh gu sgiobalta, a’ lughdachadh gu mòr a ’bhuaidh air toraidhean deuchainneach às deidh sin.

■ Tha siostam RT agus qPCR leasaichte a’ dèanamh an tar-sgrìobhadh cùil RT-PCR dà-cheum nas èifeachdaiche agus PCR nas mionaidiche, agus nas seasmhaiche ri luchd-bacadh freagairt RT-qPCR.

Iarrtas Kit

Farsaingeachd an tagraidh: ceallan cultarach.

- RNA air a leigeil ma sgaoil le sampall lysis: buntainneach a-mhàin ri teamplaid RT-qPCR den uidheamachd seo.

- Faodar an cromag a chleachdadh airson na h-adhbharan a leanas: mion-sgrùdadh faireachdainn gine, dearbhadh buaidh sàmhach gine le meadhan siRNA, sgrìonadh dhrogaichean, msaa.

Diagram

Diagram qPCR Cell Direct RT

Stòradh agus beatha sgeilp

Bu chòir pàirt I den phasgan seo a stòradh aig 4 ℃;Bu chòir Pàirt II a bhith air a stòradh aig -20 ℃.

 Bu chòir Foregene Protease Plus II a stòradh aig 4℃, na reothadh aig -20 ℃.

 Reagent 2×Direct qPCR Mix-SYBR bu chòir a stòradh aig -20anns an dorchadas;ma thèid a chleachdadh gu tric, faodar a stòradh aig 4 cuideachd℃ airson stòradh geàrr-ùine (cleachd suas taobh a-staigh 10 latha).


  • Roimhe:
  • Air adhart:

  • Prionnsabalan dealbhaidh fìor-ùine PCR primer

    Air adhart Primer agus Reverse Primer

    Airson Real Time PCR, tha dealbhadh primer glè chudromach.Tha primers co-cheangailte ri sònrachas agus èifeachdas leudachadh PCR, agus faodar an dealbhadh le iomradh air na prionnsapalan a leanas:

    Fad primer: 18-30bp.

    Susbaint GC: 40-60%.

    Luach Tm: Faodaidh bathar-bog dealbhaidh primer, leithid Primer 5, luach Tm a’ phrìomhaire a thoirt seachad.Bu chòir luachan Tm nan primers suas an abhainn agus sìos an abhainn a bhith cho faisg ‘s a ghabhas.Faodar am foirmle àireamhachaidh Tm a chleachdadh cuideachd: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).Nuair a bhios tu a’ coileanadh PCR, tha teòthachd nas ìsle na luach Tm primer de 5 ° C mar as trice air a thaghadh mar an teòthachd annealing (faodaidh an àrdachadh co-fhreagarrach ann an teòthachd analachaidh sònrachas an ath-bhualadh PCR àrdachadh).

    Primers agus toraidhean PCR:

    Is fheàrr fad toraidh meudachaidh primer PCR dealbhaidh 100-150bp.

    Bu chòir primers dealbhaidh ann an raon structarail àrd-sgoile an teamplaid a sheachnadh cho mòr ‘s as urrainn.

    Seachain a bhith a’ cruthachadh 2 bhunait co-phàirteach no barrachd eadar na cinn 3 ′ de phrìomhairean suas an abhainn agus sìos an abhainn.

    Chan urrainn bunait crìochnachaidh Primer 3 ′ a bhith an làthair le 3 G no C leantainneach a bharrachd.

    Chan urrainn structaran co-phàirteach a bhith aig na primers fhèin, air neo thèid structar fuilt a chruthachadh, a bheir buaidh air leudachadh PCR.

    Bu chòir ATCG a bhith air a chuairteachadh cho cothromach ‘s a ghabhas anns an t-sreath primer, agus bu chòir bunait crìochnachaidh 3 ′ a sheachnadh mar T.

    Pàipear-taice 1: Pasgan leasachail co-phàirteach Cell Direct RT-qPCR Kit

    1.Fuasgladh Cell Lysis


    Fuasgladh Cell Lysis

    Co-phàirtean kit

    (siostam lysis 24-tobar / tobar)

    DRT-01011-A1

    DRT-01011-A2

    100 T

    500 T

    Pàirtmi

    Bufair CL

    20 ml

    100 ml

    Foregene Protease Plus II

    400 μl

    1 ml × 2

    Bufair ST

    1 ml × 2

    10 ml

    PàirtII

    inneal-sgrios DNA

    400 μl

    1 ml × 2

    2.RT Measgachadh


    Measgachadh RT

    Co-phàirtean kit

    (siostam freagairt 20 μl)

    DRT-01011-B1

    200 T

    5 × measgachadh RT dìreach

    800 μl

    Gun RNase ddH2O

    1,7 ml × 2

     

    Measgachadh 3.qPCR


    measgachadh qPCR

    Co-phàirtean kit

    (siostam freagairt 20 μl)

    DRT-01011-C1

    DRT-01011-C2

    200 T

    1000 T

    2 × Dìreach qPCR Mix-SYBR

    1 ml × 2

    1,7 ml × 6

    Dath iomraidh 50 × ROX

    40 μl

    200 μl

    Gun RNase ddH2O

    1,7 ml

    10 ml

    Sgrìobh do theachdaireachd an seo agus cuir thugainn e

    Co-cheangailteBathar