Cell Direct RT qPCR Kit - SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready Kit qRT-PCR aon-cheum
Tuairisgeulan
Bidh an uidheamachd seo a’ cleachdadh siostam bufair lysis gun samhail a dh’ fhaodas RNA a leigeil ma sgaoil gu sgiobalta bho shamhlaichean cealla cultarach airson ath-bheachdan RT-qPCR, agus mar sin a’ cur às don phròiseas glanaidh RNA a tha a’ caitheamh ùine agus a’ saothair.Gheibhear an teamplaid RNA ann an dìreach 7 mionaidean.An 5×Dìreach RT Mix agus 2×Faodaidh ath-bheachdan dìreach qPCR Mix-SYBR a bheir an uidheamachd seachad toraidhean PCR cainneachdail fìor-ùine fhaighinn gu luath agus gu h-èifeachdach.
5×Dìreach RT Mix agus 2×Tha fulangas dìon làidir aig qPCR Mix-SYBR dìreach, agus faodar lysate nan sampallan a chleachdadh mar theamplaid airson RT-qPCR gu dìreach.Anns a’ ghoireas seo tha an transcriptase cùil Foregene àrd-dàimh sònraichte RNA, agus DNA polymerase Hot D-Taq, dNTPs, MgCl2, bufair freagairt, optimizer PCR agus stàball.
Sònrachaidhean
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Co-phàirtean kit
| Pàirt I | Bufair CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Bufair ST | |
| Pàirt II | inneal-sgrios DNA |
| 5 × measgachadh RT dìreach | |
| 2 × Dìreach qPCR Mix-SYBR | |
| Dath iomraidh 50 × ROX | |
| RNase-Free ddH2O | |
| Stiùiridhean | |
Feartan & buannachdan
■Simple agus èifeachdach: le teicneòlas Cell Direct RT, gheibhear sampallan RNA ann an dìreach 7 mionaidean.
■ Tha iarrtas sampall beag, cho ìosal ri 10 ceallan faodar a dhearbhadh.
■ Treòrachadh àrd: lorgaidh e RNA gu luath ann an ceallan a tha air an àiteachadh ann an truinnsearan 384, 96, 24, 12, 6-tobar.
■ Faodaidh DNA Eraser genomes a chaidh a leigeil ma sgaoil a thoirt air falbh gu sgiobalta, a’ lughdachadh gu mòr a ’bhuaidh air toraidhean deuchainneach às deidh sin.
■ Tha siostam RT agus qPCR leasaichte a’ dèanamh an tar-sgrìobhadh cùil RT-PCR dà-cheum nas èifeachdaiche agus PCR nas mionaidiche, agus nas seasmhaiche ri luchd-bacadh freagairt RT-qPCR.
Iarrtas kit
Farsaingeachd an tagraidh: ceallan cultarach.
- RNA air a leigeil ma sgaoil le sampall lysis: buntainneach a-mhàin ri teamplaid RT-qPCR den uidheamachd seo.
- Faodar an cromag a chleachdadh airson na h-adhbharan a leanas: mion-sgrùdadh faireachdainn gine, dearbhadh buaidh sàmhach gine le meadhan siRNA, sgrìonadh dhrogaichean, msaa.
Diagram
Stòradh agus beatha sgeilp
Bu chòir pàirt I den phasgan seo a stòradh aig 4 ℃;Bu chòir Pàirt II a bhith air a stòradh aig -20 ℃.
Bu chòir Foregene Protease Plus II a stòradh aig 4℃, na reothadh aig -20 ℃.
Reagent 2×Direct qPCR Mix-SYBR bu chòir a stòradh aig -20℃anns an dorchadas;ma thèid a chleachdadh gu tric, faodar a stòradh aig 4 cuideachd℃ airson stòradh geàrr-ùine (cleachd suas taobh a-staigh 10 latha).
Prionnsabalan dealbhaidh fìor-ùine PCR primer
Air adhart Primer agus Reverse Primer
Airson Real Time PCR, tha dealbhadh primer glè chudromach.Tha primers co-cheangailte ri sònrachas agus èifeachdas leudachadh PCR, agus faodar an dealbhadh le iomradh air na prionnsapalan a leanas:
Fad primer: 18-30bp.
Susbaint GC: 40-60%.
Luach Tm: Faodaidh bathar-bog dealbhaidh primer, leithid Primer 5, luach Tm a’ phrìomhaire a thoirt seachad.Bu chòir luachan Tm nan primers suas an abhainn agus sìos an abhainn a bhith cho faisg ‘s a ghabhas.Faodar am foirmle àireamhachaidh Tm a chleachdadh cuideachd: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).Nuair a bhios tu a’ coileanadh PCR, tha teòthachd nas ìsle na luach Tm primer de 5 ° C mar as trice air a thaghadh mar an teòthachd annealing (faodaidh an àrdachadh co-fhreagarrach ann an teòthachd analachaidh sònrachas an ath-bhualadh PCR àrdachadh).
Primers agus toraidhean PCR:
Is fheàrr fad toraidh meudachaidh primer PCR dealbhaidh 100-150bp.
Bu chòir primers dealbhaidh ann an raon structarail àrd-sgoile an teamplaid a sheachnadh cho mòr ‘s as urrainn.
Seachain a bhith a’ cruthachadh 2 bhunait co-phàirteach no barrachd eadar na cinn 3 ′ de phrìomhairean suas an abhainn agus sìos an abhainn.
Chan urrainn bunait crìochnachaidh Primer 3 ′ a bhith an làthair le 3 G no C leantainneach a bharrachd.
Chan urrainn structaran co-phàirteach a bhith aig na primers fhèin, air neo thèid structar fuilt a chruthachadh, a bheir buaidh air leudachadh PCR.
Bu chòir ATCG a bhith air a chuairteachadh cho cothromach ‘s a ghabhas anns an t-sreath primer, agus bu chòir bunait crìochnachaidh 3 ′ a sheachnadh mar T.
Pàipear-taice 1: Pasgan leasachail co-phàirteach Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Fuasgladh Cell Lysis
|
| |||
| Co-phàirtean kit (siostam lysis 24-tobar / tobar) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Pàirtmi | Bufair CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Bufair ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PàirtII | inneal-sgrios DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Measgachadh
|
| |
| Co-phàirtean kit (siostam freagairt 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × measgachadh RT dìreach | 800 μl |
| Gun RNase ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Co-phàirtean kit (siostam freagairt 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Dìreach qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| Dath iomraidh 50 × ROX | 40 μl | 200 μl |
| Gun RNase ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Leabhar-làimhe stiùiridh:
