Tha RNase na fhacal mothachail nach eil mòran oileanach a bhios gu tric a’ dèanamh deuchainnean às-tharraing RNA ag iarraidh a chluinntinn.Le làn armachd, chaidh an RNA a chaidh a thoirt a-mach mu dheireadh leis na h-ath-bheachdan fìor phuinnseanta phenol agus cloroform a mhilleadh.Chan eil mi rèidh!!!An-diugh, leig dhuinn sùil a thoirt air cò às a thàinig an Rnase ainmeil.

Is e nuclease a th’ ann an Ribonuclease (RNase), no RNase, as urrainn RNA a uisgeachadh gu bhith na mholacilean beaga.Tha RNase, mar phròtain beag moileciuil, gu neo-àbhaisteach seasmhach .Chan urrainn dha sterilization smùid àbhaisteach aig teòthachd àrd agus bruthadh àrd agus luchd-dìon pròtain a chuir an gnìomh gu tur.Tha seasmhachd RNase gu ìre mhòr a’ tighinn bho na bannan disulfide san structar.Mar eisimpleir, chan eil anns an RNase de pancreas crodh a thathas a’ cleachdadh gu cumanta ach 124 amino-aigéid, ach tha 4 bannan disulfide ann.Bidh ceangal sulfur agus ceangal disulfide a’ toirt seachad RNase le seasmhachd teirmeach sàr-mhath.A bharrachd air an sin, tha cuideam mòr moileciuil an ìre mhath beag aig rnase agus faodaidh e a cho-chòrdadh tùsail a thoirt air ais gu luath ann an iomadh cùis.

A bharrachd air a bhith air leth seasmhach,Tha RNases uile-làthaireach san obair-lann .Tha RNase na inneal dìon bith-eòlasach.Airson cealla, bidh RNA exogenous gu tric marbhtach.An coimeas ri DNA exogenous, tha RNA exogenous gu tric nas cunnartaiche.Tha RNA air ath-sgrìobhadh agus air eadar-theangachadh gu toilichte, agus mar sin tha cha mhòr a h-uile fàs-bheairt air RNase a leasachadh gus dìon an aghaidh ionnsaigh air RNA exogenous.Mar sin, bidh na ceallan bacterial a tha air an àiteachadh san obair-lann agus thusa a bheir a-mach RNA a ’toirt a-mach àille RNase.Ann an lionntan bodhaig daonna (seile, deòir, msaa) tha tòrr RNase, mar sin na bi a’ caoineadh nuair a tha RNA air a dhol sìos.Mar as motha a ghlaodhas tu, is ann as miosa a bhios an truailleadh RNA!!Chan eil Sister Daiyu freagarrach airson às-tharraing RNA!

A bharrachd air an sin, tha tòrr RNase anns a’ chraiceann fìnealta agad, agus tha RNase anns na comharran, na pìoban, na dorsan fuarachaidh agus na làmhan dorais air an do chuir an craiceann suathadh.

Le uimhir de chrith, leig dhuinn sùil a thoirt air mar a dhèiligeas sinn ri RNase.

Is e a 'chiad rud a tha a h-uile duine a' smaoineachadh nuair a tha iad a 'toirt air falbh RNADEPC(pyrocarbonate diethyl).Bidh DEPC gu ìre mhòr a’ dì-nàdarachadh a ’phròtain le bhith a’ tighinn còmhla ris an fhàinne imidazole den bhuidheann gnìomhach RNase histidine, agus mar sin a ’cur bacadh air gnìomhachd an einnsein.Faodaidh buaidh toirt air falbh nas fheàrr a bhith aig 0.1% DEPC air Rnase, ach feumaidh sinn aire a thoirt gur e carcinogen aithnichte a th’ ann an DEPC, agus mar sin bu chòir aire shònraichte a thoirt nuair a thathar ga chleachdadh.

Airson RNase, feumaidh sinn tòiseachadh bho dhà thaobh,Is e a’ chiad fhear casg a chuir air gnìomhachd RNase endogenous

Faodaidh ath-bheachdan às-tharraing RNA àbhaisteach leithid guanidine isothiocyanate agus DTT a tha ann an Trizol an ceangal disulfide de RNase fhosgladh, ach tha cuid de RNases ann fhathast, gu sònraichte ann an sampallan clò, mar sin thoir aire do theodhachd ìosal.

1.Sa bhad bog an sampall clò ann an naitridean leaghan às deidh a thoirt a-mach, no ann am fuasgladh glèidhteachais RNA malairteach.

2.Às deidh dhut an RNA den sampall cealla a thoirt a-mach, cuir ris an fhuasgladh lysis e agus cuir air a’ bhogsa deigh e

3. Tha e nas fheàrr naitridean leaghaidh a chleachdadh airson a bhith a 'bleith nuair a tha sampallan clò homogenized.Nuair a bhios tu a’ cleachdadh homogenizer dealain às aonais naitridean leaghaidh, thoir aire do bhith a’ fuarachadh an inneal-atharrachaidh homogenate gu tur.

Is e an dàrna fear DNase exogenous

1.Bi làn armachd, caith còta obair-lann, caith masg, agus bi cinnteach gun cuir thu ort paidhir mhiotagan ùra (na bi cho trom! Bu chòir a thoirt fa-near gu bheil Trizol uamhasach creimneach, agus tha e cuideachd gu math làidir tro mhiotagan, mar sin na bi a’ sileadh air do làmhan).

2.Feumar dèiligeadh ris a h-uile moladh pìobaireachd, tiùban EP, tiùban PCR agus uidheamachd eile de-RNase.Faodar a bhogadh ann an 0.1% DEPC agus an uairsin fo chuideam àrd.Thoir aire don obrachadh ann an cochall ceò.Faodaidh luchd-brathaidh ionadail stuthan consum a cheannach gu dìreach airson toirt air falbh enzyman.

PS: Innsidh mi dhut dòigh leisg.Ged nach urrainn teòthachd àrd agus bruthadh àrd RNase a thoirt air falbh gu tur, bheir e air falbh pàirt mhòr dheth.Tha buaidh mhath aig amannan 2 de theodhachd àrd agus bruthadh àrd, agus chan eil mòran buaidh aig toirt a-mach RNA.

3.Faodaidh deoch làidir pròtainean a dhì-nàchadh,mar sin faodar an clàr às-tharraing RNA a ghlanadh le 75% alcol , agus faodar miotagan a spìonadh le deoch làidir cuideachd.

4.Bu chòir dèiligeadh ris an fhuasgladh sgaoilidh RNA mu dheireadh agus an tiùb centrifuge de-RNase cuideachd.Tha uisge DEPC na fhuasgladh sgaoilidh RNA air a chleachdadh gu cumanta.Bruidhnidh sinn mun dòigh ullachaidh ceart airson uisge DEPC (cuimhnich gun dèan thu ath-phacaigeadh air an DEPC malairteach nuair a cheannaicheas tu e)

Cuir DEPC ri uisge fìor-ghlan aig 1:1000, crathadh gu math, leig seachad seasamh thar oidhche aig 37 ° C, agus sterilize aig 121 ° C fo teòthachd àrd agus cuideam àrd airson 15 mionaidean.Faodar uisge DEPC a stòradh aig -20 ° C ann an aliquots 1ml.

Mu dheireadh, airson geàrr-chunntas: is e teòthachd ìosal an rud as cudromaiche, thathas a’ làimhseachadh stuthan consum gu math, làn armachd agus nas lugha de bhruidhinn!

Uill, sin agad e airson ro-innleachd an latha an-diugh.Tha mi a’ guidhe dhut a h-uile dùmhlachd RNA agus purrachd air an tug thu iomradh.Tha an dà A260 / A280 aig 2.0!!!

Gu dearbh, ma chleachdas tu aobrachadh teòthachd an t-seòmair pasgan às-tharraing RNA, is dòcha nach coinnich thu ris na duilgheadasan gu h-àrd.

Bidh gnìomhachd aig teòthachd an t-seòmair, gun a bhith a’ cur DNase a-steach, a’ toirt a-mach RNA iomlan bho cheallan ann an 11 mionaidean, agus a’ toirt a-mach RNA iomlan bho fhigheagan no lusan bheathaichean ann an 30 mionaid.

Airson sampallan deuchainn, cuir fios gu:overseas@foregene.com

Bathar co-cheangailte:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/