Dè a th’ ann am banachdach mRNA
Bidh a’ bhanachdach mRNA a’ gluasad RNA gu ceallan na bodhaig gus antigens pròtain a chuir an cèill agus a thoirt a-mach às deidh atharrachaidhean iomchaidh ann an vitro, agus mar sin a’ toirt air a’ bhodhaig freagairt dìonach a thoirt gu buil an-aghaidh an antigen, agus mar sin a’ leudachadh comas dìon na bodhaig.[1,3].
Figear 1: Diagram sgeamach de bhuaidh in-stealladh dìreach de bhanachdach mRNA [2]
Seòrsachadh banachdachan mRNA
Tha banachdachan mRNA air an roinn ann an dà sheòrsa:neo-mhothachailmRNA agusfèin-mheudachadhmRNA: chan e a-mhàin gu bheil mRNA fèin-leudachadh a’ còdachadh an antigen targaid, ach cuideachd a’ còdachadh an ath-riochdachadh a bheir comas do leudachadh RNA intracellular agus uidheamachd faireachdainn pròtain.Chan eil banachdachan mRNA nach eil ag ath-riochdachadh ach a’ còdachadh antigens targaid agus tha roinnean 5’ agus 3’neo-eadar-theangachadh (UTR) ann.Bidh iad a’ toirt seachad brosnachadh farsaing air sùbailteachd agus dìonachd dhùthchasach, is e sin faireachdainn antigen in situ agus tar-chuir comharran cunnart, agus tha na tagraidhean a leanas aca Feartan[2,3]
● An urrainn dhaibh brosnachadh farsaing a thoirt seachad air sùbailteachd agus dìonachd dhùthchasach, is e sin faireachdainn antigen in situ agus tar-chuir chomharran cunnart
● Is urrainn dha freagairt dìon “cothromach” a bhrosnachadh, a’ toirt a-steach luchd-buaidh èibhinn agus ceallach agus cuimhne dìonach
● Is urrainn dhaibh diofar antigens a chur còmhla gun a bhith a' dèanamh banachdachan nas iom-fhillte
• Faodar leasachadh leantainneach air comas dìonachd a choileanadh tro bhanachdach a-rithist, agus chan eil freagairt dìon sam bith no glè bheag don neach-giùlain
● Faodaidh banachdachan mRNA teas-seasmhach giùlan agus stòradh banachdachan a dhèanamh nas sìmplidhe
Figear 2: Diagram sgeamach de bhanachdach mRNA agus an uidheamachd faireachdainn antigen aige [4]
Feartan banachdachan mRNA
An coimeas ri banachdachan traidiseanta, tha pròiseasan toraidh sìmplidh aig banachdachan mRNA, astaran leasachaidh luath, gun fheum air cultar cealla, agus cosgais ìosal.An coimeas ri banachdachan DNA, chan fheum banachdachan mRNA a dhol a-steach don niuclas agus chan eil cunnart ann gun tèid iad a-steach don genoma aoigheachd.Faodar an leth-bheatha atharrachadh le atharrachadh.
Clàr 1: Buannachdan agus eas-bhuannachdan banachdachan mRNA
|
| Buannachd | Dìth |
| banachdach mRNA | Rannsachadh agus leasachadh luath, cha toir cinneasachadh banachdach ach 40 latha | Brosnaich freagairt dìon neo-riatanach
|
| neo-sheasmhachd mRNA fo chumhachan eòlas-inntinn, furasta a thruailleadh | Cha tèid e a-steach don genoma gus mùthaidhean teirpeach a sheachnadh
| |
| Chan eil feum air comharra ionadail niuclasach, tar-sgrìobhadh | Tha èifeachdas an niuclasach sàbhailteachd fhathast ri dhearbhadh
|
Figear 3: Clàr sruth de chinneasachadh agus ullachadh banachdach mRNA [4]
Foregene Viral RNA Iomallach uidheamachd
RT-qPCR furasta (Aon cheum)
Ro-innleachdan nas fheàrr airson ullachadh banachdachan mRNA
Air sgàth droch sheasmhachd mRNA fhèin, crìonadh furasta le nucleases ann am figheagan, èifeachdas inntrigidh cealla ìosal, agus èifeachdas eadar-theangachaidh ìosal, tha na h-uireasbhaidhean sin a’ cuingealachadh cleachdadh banachdachan mRNA.Tha àite fìor chudromach aig èifeachdas eadar-theangachaidh cuideachd.Faodar carbadan lìbhrigidh a roinn ann an vectaran viral agus vectaran neo-bhìorasach (a ’toirt a-steach liposomes, neo-liposomes, bhìorasan, nanoparticles, msaa).Mar sin, tha feum air ceumannan leasachaidh iomchaidh.Tha na leanas na ro-innleachd leasachaidh cungaidh-leigheis airson ullachadh mRNA[2]
1 Synthesize analogs caip no cleachd einnseanan capaidh gus mRNA a dhèanamh seasmhach agus eadar-theangachadh pròtain àrdachadh le bhith a’ ceangal ri factar tòiseachaidh eadar-theangachadh eukaryotic 4E (EIF4E)
2 Atharraich na h-eileamaidean anns an roinn 5 ′-neo-eadar-theangachadh (UTR) agus 3 ′-UTR gus mRNA a dhèanamh seasmhach agus eadar-theangachadh pròtain àrdachadh
3 Le bhith a’ cur earball Poly(A) ris faodaidh e mRNA a dhèanamh seasmhach agus eadar-theangachadh pròtain àrdachadh
4 nucleosides atharraichte gus gnìomhachd dìonachd gnèitheach a lughdachadh agus eadar-theangachadh àrdachadh
5 Faodaidh làimhseachadh le RNase III agus glanadh cromatagrafaidheachd pròtain luath (FPLC) gnìomhachd dìon a lughdachadh agus eadar-theangachadh àrdachadh
6 Dèan an ìre as fheàrr de shreathan no còdan gus eadar-theangachadh a mheudachadh
7 Co-lìbhrigeadh fhactaran tòiseachaidh eadar-theangachaidh agus dòighean eile gus eadar-theangachadh agus immunogenicity atharrachadh
Figear 4: Pròiseas cinneasachaidh agus co-chruinneachaidh mRNA tar-sgrìobhadh in vitro (IVT) [5]
Ullachadh mòr de DNA plasmid
Bidh glanadh DNA plasmid gu ìre mhòr a’ toirt air falbh truaillearan leithid RNA, endotoxin DNA cearcall-fhosgailte, pròtain aoigheachd agus searbhag niuclasach aoigheachd, agus mar as trice ag atharrachadh plasmid ath-chuingealaichte gu E. coli.Bidh E. coli a’ dol tro choipeadh àrd-dùmhlachd, an uairsin dealachadh solid-liquid, agus cruinneachadh de E. coli.Tha an E. coli an uairsin fo smachd lysis alcalin, dealachadh solid-liquid centrifugal agus soilleireachadh microfiltration às deidh lysis, ultrafiltration agus dùmhlachd às deidh soilleireachadh, agus an uairsin glanadh cromatagrafach.
Glanadh DNA plasmid:
Kit Mini Plasmid Coitcheann Foregene
【1】 苗鹤凡, 郭勇, slainte.mRNA疫苗研究进展及挑战[J].免疫学杂志, 2016(05):446-449.
【2】Pardi N, Hogan MJ, Porter FW, et al.banachdachan mRNA - àm ùr ann am banachdach [J].Lèirmheasan Nàdair Lorg Dhrugaichean, 2018.
【3】Kramps T., Elbers K. (2017) Ro-ràdh airson banachdachan RNA.Ann an: Kramps T., Elbers K. (deas) Banachdachan RNA.Dòighean ann am Bith-eòlas Molecular, leabhar 1499. Humana Press, New York, NY.
【4】Maruggi G, Zhang C, Li J, et al.mRNA mar theicneòlas cruth-atharrachail airson leasachadh banachdach gus smachd a chumail air galairean gabhaltach[J].Leigheas moileciuil, 2019.
【5】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, ,Ag tàillearachd banachdach mRNA gus a bhith a’ cothromachadh freagairt dìonachd dhùthchasach / atharrachail, gluasadan ann an leigheas moileciuil, Leabhar 26, Iris 3,2020, Duilleagan 311-323.
Ùine puist: Lùnastal-05-2021
