Molaidhean airson Ath-bheothachadh Glue a leasachadh

1. Meudaich an luchd sampall rè electrophoresis.

2. Cleachd bufair electrophoresis a tha air ùr ullachadh.

3. Nuair a bhios tu a 'gearradh glue, feuch ris a' ghiùlan a ghearradh a-mhàin le stiallan gus an ìre de ghearradh glue a lùghdachadh: chan eil feum air glaodh le glè bheag de phìosan adhbhar, air neo bheir e buaidh air an ìre ath-bheothachaidh.

4. Às deidh dhut dà phìos glaodh no barrachd a leaghadh, cleachd tiùb ge bith dè cho mòr sa tha an tomhas-lìonaidh agus gluais e chun aon cholbh.

5. Faodaidh am fuasgladh a tha air a chur ris san t-sol a bhith beagan a bharrachd, a tha nas freagarraiche airson ceangal DNA ris an membran, ach mar as trice chan eil e nas àirde na 750ul.

6. Is e an iuchair airson faighinn air ais gel DNA a cheangal ris a 'cholbh tro cho-chruinneachadh salainn, searbhachd (cosgais) agus hydrophobicity an fhuasglaidh sa cholbh.Mar sin, ma tha pH bufair electrophoresis ro àrd, faodar 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) a chur ris an t-sol;gus casg a chuir air moileciuilean DNA nas fheàrr air an membran, faodar 30% isopropanol a chuir ri teas a-steach don leaghan às deidh an glaodh a sgaoileadh.

7. Mus cuir thu an eluent, fàg an colbh aig teòthachd an t-seòmair airson beagan mhionaidean (mu 10 mionaidean) gus an ethanol a ghlanadh gu tur.

8. Mu dheireadh, cuir ris nas lugha de chomas gus an tomhas ath-bheothachaidh a lùghdachadh.San fharsaingeachd, thathar a 'cleachdadh 30-50μl eluent airson elution (chan eil e ro bheag, air dhòigh eile cha bhith e comasach dha an membran a fhliuchadh, nach eil freagarrach airson elution);tha na boinneagan elution ann am meadhan na membran, gus an DNA a tha ceangailte ris an membran a thoirt a-mach gu tur.

9. Às deidh an eluent a chuir ris, faodar a chuir a-steach ann an amar uisge 55 ceum airson 5 mionaidean no a chuir ann an amar uisge 50 ceum airson barrachd air 10 mionaidean, no a sheulachadh le parafilm aig 4 ceum tron ​​​​oidhche, agus an uairsin centrifuged airson faighinn seachad air an ath latha, tha a ’bhuaidh math.

10.Cuir an centrifuged eluate air ais chun a 'cholbh adsorption agus centrifuge a-rithist.

Modhan agus modhan mionaideach airson faighinn seachad air toradh PCR

1. Ath-chuairteachadh rubair àbhaisteach

Ma tha thu airson an glaodh fhaighinn air ais, tha e nas fheàrr pasgan a chleachdadh, a tha goireasach agus aig a bheil ìre ath-bheothachaidh beagan nas àirde.Ma dh’ fheumas tu fhaighinn air ais le làimh, faodaidh tu 3 uiread de mheud TE a chuir ris às deidh dhut an glaodh a ghearradh.Às deidh dha leaghadh ann an amar uisge, bidh phenol, phenol / cloroform air an toirt a-mach gu glan, agus tha ethanol air a chuir air falbh.Sin e.

2. Ath-bheothachadh DNA bho ghels puing leaghaidh ìosal

Glanadh pìosan DNA Cuir TE (10 mmol / l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol / l EDTA) co-ionann ri meud an gel, agus cuir ann an amar uisge 65 ° C airson 5 mionaidean gus an gel a sgaoileadh gu tur.

Às deidh dha a bhith air a thoirt gu teòthachd an t-seòmair, chaidh an aon uiread de phenol (sàthaichte le TE, TE a sheulachadh anns an t-sreath àrd, agus chaidh an ìre ìosal de phenol a thoirt air falbh), agus chaidh am measgachadh a mheasgachadh gu socair (chan eil feum air measgachadh), agus centrifuged aig 12,000 rpm airson 3 mionaidean.Dèan ath-aithris 1-2 uair.

Gabh an supernatant, cuir 0.1 tomhas-lìonaidh de sodium acetate 3mol / L (pH 5.2) agus 2.5 uair de ethanol iomlan gus sileadh ethanol a dhèanamh.Fuasgail an DNA fìor-ghlan le tomhas iomchaidh de TE, tomhas an susbaint, agus ullaich airson a chleachdadh (faodar a chleachdadh airson mion-sgrùdadh structar gine targaid, ullachadh probe, msaa).

3. PCR ath-bheothachadh le deagh amplification specificity

Ma tha sònrachas meudachaidh PCR math, chan eil ann ach glanadh sìmplidh agus faighinn air ais toradh PCR.Faodaidh tu 50ug / ml proteinase K a chur ris an toradh PCR, 37 ceum airson 1h, toirt a-mach aon uair le phenol / cloroform, toirt a-mach aon uair le cloroform, agus cuir 0.1 tomhas-lìonaidh den supernatant.Chaidh an sodium acetate fhaighinn air ais le sileadh le 2.5 leabhraichean de làn ethanol.

Bathar co-cheangailte:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/