O chionn ghoirid, lorg mi rudeigin iongantach!Tha mòran de phroifeiseantaich deuchainn adhartach timcheall air nach eil eadhon eòlach air cuid de phuingean eòlas deuchainneach fìor bhunasach.

Mar eisimpleir, an urrainn dhut na ceistean a leanas a fhreagairt?

A bheil diofar eadar OD260 agus A260?Dè tha gach fear a’ ciallachadh?
Is e OD an giorrachadh de dhlùths optigeach (dùmhlachd optigeach), is e A an giorrachadh sùghaidh (absorbance), tha an dà bhun-bheachd mar an ceudna, is e “dùmhlachd optigeach” “absorbance”, ach tha “dùmhlachd optigeach” a rèir a’ mhòr-chuid de inbhean nàiseanta agus nas cunbhalaiche.

Mar as trice bidh sinn a’ tomhas an luach OD aig 260nm gus an dùmhlachd searbhag niuclasach obrachadh a-mach, mar sin dè tha 1OD a’ riochdachadh?
Tha an ìre as àirde de in-ghabhail aig searbhag niuclasach aig tonn de 260nm, anns a bheil an dà chuid DNA agus RNA, a bharrachd air mìrean searbhagach niuclasach (is e seo am prìomh phuing).
Chaidh an luach OD a chaidh a thomhas aig tonn-tonn de 260 nm a chlàradh mar OD260.Ma tha an sampall fìor-ghlan, faodaidh luach OD260 obrachadh a-mach dùmhlachd an t-sampall searbhag niuclasach.
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (DNA dà-shreath)
= 37 μg/ml ssDNA (DNA aon-shreath)
= 40 μg/ml RNA
= 30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
A bheil ceangal agus eadar-dhealachadh sam bith eadar RT-PCR, Realtime-PCR agus QPCR?
Tha RT-PCR goirid airson Reverse Transcription PCR
Fìor-ùine PCR = qPCR, goirid airson PCR Cainnteach Fìor-ùine
Ged a tha e coltach gu bheil Real Time PCR (PCR cainneachdail fìor-ùine) agus Reverse Transcription PCR (PCR tar-sgrìobhadh cùil) air an giorrachadh mar RT-PCR.Ach is e an co-chruinneachadh eadar-nàiseanta: Tha RT-PCR gu sònraichte a’ toirt iomradh air tar-sgrìobhadh cùil PCR.

Dè na nt, bp, agus kb a thathas a’ cleachdadh gu cumanta airson cunntas a thoirt air fad DNA/RNA ann am bith-eòlas?
nt = nucleotide
bp = paidhir bhunaiteach
kb = kilobase

Gu dearbh, chanadh tu nach eil dragh aig mòran dhaoine mun mhion-fhiosrachadh seo!Bidh a h-uile duine a 'dèanamh seo, agus chan fhaigh duine sam bith dhut dè a th' ann.Tha fios agad nach eil seo riatanach, ceart?

Chan e, chan e, chan e, tha e glè fheumail fios a bhith agad air seo!air sgàth dè?
Leis gu bheil thu airson artaigil a phostadh!Bràthair!Co-dhiù a tha thu ag amas air ceumnachadh no a’ leantainn euchdan rannsachaidh saidheansail, feumaidh tu a bhith an urra ri artaigilean airson bruidhinn!

Bu chòir às-tharraing searbhag niuclasach a bhith mar an deuchainn as sìmplidh agus as bunaitiche.Bidh càileachd às-tharraing searbhag niuclasach gu dìreach a’ dearbhadh toraidhean deuchainnean às deidh sin.

Ged a tha mi air a ràdh iomadh uair, tha mòran charaidean ann fhathast nach eil a 'gabhail cùram.An turas seo chuir mi romham gluasad a-mach às an artaigil!

Fiosrachadh as ìsle airson foillseachadh deuchainnean PCR fìor-ùine, ris an canar MIQE, na sheata de stiùiridhean deuchainn cainneachdail fluorescence a chaidh a chuir air bhog gu h-eadar-nàiseanta, a tha a’ moladh inbhean as ìsle airson an fhiosrachaidh deuchainneach a tha riatanach airson deuchainnean cainneachdail PCR a mheasadh agus artaigilean fhoillseachadh.Tro na suidheachaidhean deuchainneach agus na dòighean sgrùdaidh a thug an neach-deuchainn seachad, faodaidh an luchd-sgrùdaidh measadh nas fheàrr a dhèanamh air èifeachd sgeama deuchainneach an neach-rannsachaidh.

Chìthear, anns an roinn de tharraing searbhag niuclasach, gun deach na nithean lorgaidh a leanas a mholadh,

Tha “E” a’ nochdadh fiosrachadh a dh’fheumar a thoirt seachad agus tha “D” a’ comharrachadh fiosrachadh a bu chòir a thoirt seachad ma tha sin riatanach.

Tha am foirm gu math toinnte, gu dearbh, tha mi airson a ràdh gum feum a h-uile duine tòiseachadh bho

purrachd (D), toradh (D), ionracas (E) agus cunbhalachd (E) gus searbhagan niuclasach a mheasadh anns na ceithir taobhan sin.

A rèir cleachdaidhean deuchainneach, an-toiseach bruidhinn mu na dòighean measaidh air purrachd agus dùmhlachd.

Is e tomhas OD an dòigh lorgaidh as fheàrr le luchd-deuchainn.A thaobh a 'phrionnsapail, cha tèid mi a-steach gu mion-fhiosrachadh an seo.Bidh mòran de deuchainn-lannan a-nis a’ cleachdadh spectrophotometers ultra-micro gus sgrùdadh cainneachdail a dhèanamh gu dìreach air sampallan searbhag niuclasach.Fhad ‘s a tha e a’ taisbeanadh an luach sùghaidh, bheir am prògram gu dìreach an luach dùmhlachd (searbhag niuclasach, pròtain agus dath fluorescent) agus co-mheasan co-cheangailte riutha.A thaobh mion-sgrùdadh air luach OD, Sàbhail an dealbh seo agus bidh thu ceart gu leòr.

Liosta fuasglaidh luach OD uile-choitcheann

Ach, tha beagan uaimhean ann a dh’ fheumar a thoirt a-mach air leth dhut.

(Às deidh a h-uile càil, tha fios agam gum feum thu a bhith mar an fheadhainn a shàbhalas agus a dh’ fheitheamh gus am bi feum agad orra!)

Nota 1 Uidheam

Bheir diofar uidheamachd buaidh air luach OD.Cho fad ‘s a tha an OD260 taobh a-staigh raon sònraichte, tha luachan OD230 agus OD280 brìoghmhor.Mar eisimpleir, is e an raon sùghaidh den Eppendorf D30 cumanta aig 260nm 0 ~ 3A, agus tha an NanoDrop One of Thermo aig 260nm.Tha an raon sùghaidh de 0.5 ~ 62.5A.

Nota 2Imoibrí caolachaidh

Faodaidh buaidh a thoirt air luach OD le lagachadh diofar ath-bheachdan.Mar eisimpleir, leughadh OD260/280 de RNA fìor-ghlan ann am pH7.5 10mM Tristha bufair eadar 1.9-2.1, fhad 'sa tha e a-staighfuasgladh uisgeach neodrachbidh an co-mheas nas ìsle, is dòcha dìreach 1.8-2.0, ach chan eil seo a 'ciallachadh gu bheil càileachd RNA ag atharrachadh eadar-dhealachadh.

Nota 3Stuthan air fhàgail

Bheir gu bheil stuthan air fhàgail buaidh air neo-mhearachdachd tomhas dùmhlachd searbhag niuclasach, agus mar sin feumar fuigheall pròtain, phenol, polysaccharide agus polyphenol ann an sampallan searbhag niuclasach a sheachnadh cho mòr ‘s as urrainn.

Ach, gu dearbh, is e seann dhòigh a th’ ann an às-tharraing le ath-bheachdan organach.Ann an innealan malairteach, faodar a’ bhuaidh às-tharraing a choileanadh tro cholbh sùghaidh stèidhichte air silica còmhla ri centrifugation, a’ seachnadh ath-bheachdan organach puinnseanta agus cronail a tha duilich a thoirt air falbh, msaa. An duilgheadas, leithidChan eil pasgan às-tharraing searbhag niuclasach Foregene, a’ cleachdadh DNase/RNase agus ath-bheachdan organach puinnseanta tron ​​​​obair, luath agus sàbhailte, agus antha buaidhmath(thuirt e gun fhiosta gu robh e maol, ach tha fios agam gu bheil thu airson faighinn a-mach).

Eisimpleir 1: Toradh às-tharraing DNA genomic agus purrachd

Bidh Foregene Soil DNA Iomrachadh Kit (DE-05511) a’ làimhseachadh sampallan talmhainn bho dhiofar thùsan, agus tha meud agus purrachd an DNA genomic a gheibhear air a shealltainn sa chlàr a leanas:
Eisimpleir 2: Toradh às-tharraing RNA meitabileach agus purrachd

Phròiseas Animal Total RNA Iomrachadh Kit (RE-03012) grunn shamhlaichean clò, agus tha meud agus purrachd RNA a fhuaireadh air a shealltainn sa chlàr gu h-ìosal (airson clò luchag):
Ach, na bi a’ smaoineachadh gu bheil thu deiseil leis an luach OD.A bheil cùram sam bith agad de na prìomh phuingean a tharraing mi dhut air a bheulaibh?

Sanas

Thèid moileciuilean searbhag niuclasach briste a thomhas cuideachd anns an sùghadh.A’ gabhail ris gu bheil fuigheall DNA genomic agad san RNA, bidh coltas gu bheil an luach OD agad gu math àrd, ach chan urrainnear an fhìor chruinneachadh de RNA a dhearbhadh.Co-dhiù a tha an RNA agad Chan eil e soilleir a bheil truailleadh ann, agus mar sin tha feum againn fhathast air dòigh measaidh coileanta gus breithneachadh nas cruinne a thoirt seachad, is e sin, am measadh iomlanachd searbhag nucleic air a bheil iomradh ann am MIQE.