Is e call èisteachd (HL) an galar ciorraim mothachaidh as cumanta ann an daoine.Ann an dùthchannan leasaichte, tha timcheall air 80% de chùisean bodhar prelingual ann an clann air adhbhrachadh le factaran ginteil.Is e an fheadhainn as cumanta uireasbhaidhean aon-gine (mar a chithear ann am Fig. 1), chaidh 124 mùthaidhean gine a lorg co-cheangailte ri call claisneachd neo-shyndromach ann an daoine, tha an còrr air adhbhrachadh le factaran àrainneachd.Is e implant cochlear (inneal dealanach air a chuir sa chluais a-staigh a bheir brosnachadh dealain gu dìreach don nerve claisneachd) an roghainn as èifeachdaiche airson làimhseachadh HL trom, agus faodaidh cobhair èisteachd (inneal dealanach taobh a-muigh a bhios ag atharrachadh agus ag àrdachadh tonnan fuaim) euslaintich le HL meadhanach a chuideachadh.Ach, chan eil drogaichean ann an-dràsta airson làimhseachadh HL oighreachail (GHL).Anns na bliadhnachan mu dheireadh, tha gine therapy air barrachd aire fhaighinn mar dhòigh gealltanach airson làimhseachadh eas-òrdugh cluais a-staigh.
Fig1.Sgaoileadh seòrsa caochlaideachd co-cheangailte ri bodhar.[1]
O chionn ghoirid, dh’fhoillsich luchd-saidheans bho Institiud Salk agus Oilthigh Sheffield toradh rannsachaidh ann an Leigheas Molecular - Dòighean & Leasachadh Clionaigeach [2], a sheall cothroman tagraidh farsaing airson leigheas gine in vivo de bhodhar oighreachail.Thuirt Uri Manor, àrd-ollamh rannsachaidh cuideachaidh aig Institiud Salk agus stiùiriche Ionad Waitt airson Biophotonics Adhartach, gun do rugadh e le fìor chall claisneachd agus bha e a’ faireachdainn gum biodh e na thiodhlac iongantach ath-nuadhachadh èisteachd.Lorg an rannsachadh a rinn e roimhe gu bheil Eps8 na phròtain riaghlaidh actin le gnìomhan ceangail is capaidh actin;ann an ceallan fuilt cochlear, tha am pròtain iom-fhillte a chaidh a chruthachadh le Eps8 le MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 agus GNAI3 sa mhòr-chuid ann am molaidhean stereocilia fada, a tha còmhla ri MYO15A a ’suidheachadh BAIAP2L2 aig molaidhean stereocilia nas giorra, riatanach airson cumail suas bagaichean fuilt.Mar sin, faodaidh Eps8 fad an stereocilia de cheallan fuilt a riaghladh, a tha riatanach airson obair èisteachd àbhaisteach;Bidh cuir às no mùthadh Eps8 a’ leantainn gu stereocilia goirid, a tha ga fhàgail comasach air fuaim a thionndadh gu ceart gu comharran dealain airson tuigse eanchainn, a tha an uair sin a’ leantainn gu bodhar..Aig an aon àm, lorg an co-obraiche Walter Marcotti, àrd-ollamh aig Oilthigh Sheffield, nach urrainn ceallan fuilt leasachadh gu h-àbhaisteach às aonais Eps8.Anns an sgrùdadh seo, thàinig Manor agus Marcotti còmhla gus sgrùdadh a dhèanamh am b’ urrainn dha Eps8 a chuir ri ceallan stereociliary an gnìomh aca a thoirt air ais agus, an uair sin, èisteachd ann an luchagan adhartachadh.Chleachd an sgioba rannsachaidh an vectar bhìoras co-cheangailte ri adeno (AAV) Anc80L65 gus an t-sreath còdaidh anns a bheil EPS8 de sheòrsa fiadhaich a lìbhrigeadh a-steach do chochlea Eps8-/- luchagan P1-P2 ùr-bhreith le in-stealladh membran uinneig cruinn;ann an ceallan fuilt cochlear lucha Chaidh obair stereocilia a chàradh mus do dh’ fhàs iad;agus bha a’ bhuaidh càraidh air a chomharrachadh le teicneòlas ìomhaighean agus tomhas stereocilia.Sheall na co-dhùnaidhean gun do mheudaich Eps8 fad stereocilia agus gun tug e air ais gnìomh cealla fuilt ann an ceallan tricead ìosal.Lorg iad cuideachd, thar ùine, gu robh coltas ann gun robh na ceallan a’ call an comas a bhith air an saoradh leis a’ ghine seo.Tha seo a’ ciallachadh gur dòcha gum feumar an làimhseachadh seo a thoirt seachad ann an utero, leis gum faodadh ceallan fuilt Eps8-/- a bhith air a thighinn gu ìre no air milleadh a chruinneachadh nas fhaide na a chàradh às deidh dha na luchagan a bhreith.“Is e pròtain a th’ ann an Eps8 le mòran ghnìomhan eadar-dhealaichte, agus tha tòrr ri sgrùdadh fhathast, ”thuirt Manor.Bidh rannsachadh san àm ri teachd a’ toirt a-steach sgrùdadh air buaidh leigheas gine Eps8 ann a bhith ag ath-nuadhachadh èisteachd aig diofar ìrean leasachaidh, agus am biodh e comasach cothroman làimhseachaidh a leudachadh.Aig an aon àm, san t-Samhain 2020, dh’ fhoillsich an t-Àrd-ollamh KarenB Avraham bho Oilthigh Tel Aviv ann an Israel na toraidhean aige anns an iris EMBO Molecular Medicine [3], a’ cleachdadh teicneòlas ginealach ùr-ghnàthach gus bhìoras neo-chinnteach co-cheangailte ri adeno AAV9-PHP a chruthachadh.B, Chaidh an locht gine ann an ceallan fuilt luchagan Syne4-/- a chàradh le bhith a’ stealladh bhìoras a’ giùlan an t-sreath còdaidh de Syne4 a-steach do chluais luchainn a-staigh, a’ leigeil leis a dhol a-steach do na ceallan fuilt agus an stuth ginteil a chaidh a ghiùlan a leigeil ma sgaoil, a’ leigeil leotha aibidh agus obrachadh gu h-àbhaisteach (mar ann am Fig. 2).
Fig2.Riochdachadh sgeamaigeach de anatomy cluais a-staigh, le fòcas air organ Corti agus gnìomh cealla nesprin-4.
Chithear gu bheil cleachdadh gine therapy gus adhbhar làimhseachadh ghalaran oighreachail aig ìre gine a choileanadh le bhith a’ cuir a-steach, a’ toirt air falbh no a’ ceartachadh ginean mutated sam bith airson làimhseachadh (is e sin, a’ cumail smachd air atharrachaidhean ginteil a’ ghalair) le buaidh clionaigeach àrd.cothroman tagraidh.Faodar na modhan gine therapy gnàthach airson bodhar le easbhaidh ginteil a roinn anns na roinnean a leanas:
ath-chur gine
Dh’fhaodar a ràdh gur e ath-chur gine an seòrsa as “sìmplidh” de leigheas gine, stèidhichte air a bhith ag aithneachadh agus a’ cur an àite gine easbhaidheach le leth-bhreac àbhaisteach no seòrsa fiadhaich den ghine.A’ chiad sgrùdadh soirbheachail air leigheas gine cluais a-staigh airson call èisteachd air adhbhrachadh le bhith a’ cuir às don ghine 3 (VGLUT3) neach-còmhdhail glutamate vesicular;Lìbhrigeadh AAV1-meadhanaichte de overexpression VGLUT3 exogenous ann an ceallan fuilt cluais a-staigh (IHCn) Faodaidh seo leantainn gu ath-bheothachadh claisneachd seasmhach, ath-bheothachadh pàirt de morphology synaptic rioban, agus freagairtean convulsive [4].Ach, anns na h-eisimpleirean a’ toirt a-steach an dà ionad gine air a lìbhrigeadh le AAV a tha air a mhìneachadh san ro-ràdh gu h-àrd, tha e cudromach toirt fa-near gu bheil na modalan lucha a thathas a’ cleachdadh airson cuid de sheòrsan eas-òrdughan call èisteachd oighreachail a tha air an sguabadh às gu ùine eadar-dhealaichte bho dhaoine, agus ann an luchagan P1, tha a’ chluais a-staigh aig ìre leasachaidh aibidh.An coimeas ri sin, tha daoine air am breith le cluais a-staigh aibidh.Tha an t-eadar-dhealachadh seo a’ cur casg air toraidhean na luchaige a chuir an sàs ann an làimhseachadh eas-òrdugh bodhar oighreachail daonna mura tèid ginealachadh a lìbhrigeadh gu cluasan aibidh lucha.
Deasachadh gine: CRISPR/Cas9
An coimeas ri “ath-chur gine”, tha leasachadh teicneòlas deasachaidh gine air tòiseachadh a’ làimhseachadh ghalaran ginteil bhon fhreumh.Gu cudromach, tha an dòigh deasachaidh gine a’ dèanamh suas easbhaidhean dòighean traidiseanta gine therapy overexpression nach eil freagarrach airson prìomh ghalaran bodhar oighreachail, agus an duilgheadas nach mair an dòigh overexpression fada.Às deidh do luchd-rannsachaidh Sìneach an allele mutant Myo6C442Y a leagail gu sònraichte ann an luchagan Myo6WT / C442Y a ’cleachdadh siostam deasachaidh gine AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2, agus taobh a-staigh 5 mìosan às deidh an leagail, luchagan chaidh gnìomh claisneachd a’ mhodail ath-nuadhachadh;aig an aon àm, chaidh fhaicinn cuideachd gun deach ìre mairsinneachd cheallan fuilt anns a’ chluais a-staigh a leasachadh, thàinig cumadh nan cilia gu cunbhalach, agus chaidh na comharran electrophysiologic a cheartachadh [5].Is e seo a’ chiad sgrùdadh san t-saoghal a chleachd teicneòlas CRISPR/Cas9 airson làimhseachadh bodhar oighreachail air adhbhrachadh le mùthadh gine Myo6, agus tha e na adhartas rannsachaidh cudromach de theicneòlas deasachaidh gine airson làimhseachadh bodhar oighreachail.Tha an eadar-theangachadh clionaigeach de làimhseachadh a’ toirt bunait làidir saidheansail.
Dòighean lìbhrigidh gene therapy
Gus am bi leigheas gine soirbheachail, chan urrainn dha moileciuilean DNA rùisgte a dhol a-steach gu ceallan gu h-èifeachdach air sgàth an hydrophilicity agus cosgais àicheil de bhuidhnean fosfáit, agus gus dèanamh cinnteach à ionracas nam moileciuilean searbhag niuclasach leasachail, feumar dòigh sàbhailte agus èifeachdach a thaghadh.Tha an DNA leasachail air a lìbhrigeadh don chill targaid no maothran.Tha AAV air a chleachdadh gu farsaing mar charbad lìbhrigidh airson làimhseachadh ghalaran air sgàth a bhuaidh gabhaltach àrd, immunogenicity ìosal, agus tropism farsaing gu diofar sheòrsaichean clò.Aig an àm seo, tha buidheann mhòr de dh’ obair rannsachaidh air tropism diofar subtypes de AAV a dhearbhadh an coimeas ri diofar sheòrsaichean cealla ann an cochlea na luchaige.Le bhith a’ cleachdadh feartan lìbhrigidh AAV còmhla ri luchd-adhartachaidh a tha sònraichte do chealla, faodaidh iad faireachdainn sònraichte cealla a choileanadh, a dh’ fhaodadh buaidhean far-targaid a lughdachadh.A bharrachd air an sin, mar roghainn eile an àite vectaran AAV traidiseanta, thathas an-còmhnaidh a’ leasachadh vectaran synthetigeach AAV ùra agus a ’nochdadh comas tar-chuir nas fheàrr anns a’ chluais a-staigh, agus is e AAV2 / Anc80L65 an fheadhainn as motha a chleachdar.Faodar dòighean lìbhrigidh neo-bhìorasach a roinn tuilleadh ann an dòighean fiosaigeach (microinjection agus electroporation) agus dòighean ceimigeach (stèidhichte air lipid, stèidhichte air polymer, agus nanoparticles òir).Chaidh an dà dhòigh-obrach a chleachdadh ann an làimhseachadh eas-òrdughan bodhar oighreachail agus tha iad air buannachdan agus crìochan eadar-dhealaichte a nochdadh.A bharrachd air a’ charbad lìbhrigidh airson gine therapy mar charbad, faodar diofar dhòighean-obrach airson rianachd gine in vivo a chleachdadh stèidhichte air diofar sheòrsaichean cealla targaid, slighean rianachd, agus èifeachd teirpeach.Tha structar toinnte a’ chluais a-staigh ga dhèanamh duilich ceallan targaid a ruighinn agus tha cuairteachadh riochdairean deasachaidh genome slaodach.Tha an labyrinth membranous suidhichte taobh a-staigh labyrinth tòidheach a’ chnàimh temporal agus a ’toirt a-steach an duct cochlear, duct semicircular, utricle, agus bailiùn.Tha an aonaranachd coimeasach aige, an ìre as lugha de chuairteachadh lymphatic, agus dealachadh bhon fhuil le cnap-starra fala-fala a’ cuingealachadh lìbhrigeadh siostamach èifeachdach de leigheas-leigheis gu luchagan ùr-bhreith a-mhàin.Gus titers viral fhaighinn a tha iomchaidh airson gine therapy, tha feum air in-stealladh ionadail dìreach de vectaran viral a-steach don chluais a-staigh.Am measg nan slighean in-stealladh stèidhichte tha [6]: (1) membran uinneag cruinn (RWM), (2) tracheostomy, (3) cochleostomy endolymphatic no perilymphatic, (4) membran uinneag cruinn a bharrachd air uinneagan Tube (CF) (mar ann am Fig. 3).
Fig3.Lìbhrigeadh cluais a-staigh de ghine therapy.
Ged a chaidh mòran adhartais a dhèanamh ann an leigheas gine, stèidhichte air amasan eadar-theangachaidh clionaigeach, feumar barrachd obrach a dhèanamh mus urrainn gin therapy a bhith na roghainn làimhseachaidh ciad loidhne airson euslaintich le galairean ginteil, gu sònraichte ann a bhith a’ leasachadh vectaran sàbhailte agus èifeachdach agus dòigh lìbhrigidh.Ach tha sinn den bheachd gum bi an seòrsa làimhseachaidh seo a dh’ aithghearr mar phrìomh stàball de leigheas pearsanaichte agus gum bi buaidh fìor mhath aige air beatha dhaoine le eas-òrdughan ginteil agus an teaghlaichean.
Tha Foregene cuideachd air pasgan sgrìonaidh àrd-chuir a chuir air bhog airson ginean cuimsichte, a tha luath agus as urrainn tar-sgrìobhadh cùil agus ath-bheachdan qPCR a dhèanamh às aonais às-tharraing RNA.
Ceanglaichean Bathar
Kit RT-qPCR Cell Direct - Taqman/SYBR GREEN I
Airson tuilleadh fiosrachaidh mun toradh, cuir fios gu:
Ùine puist: Sultain-02-2022
