Is e freagairt a th’ ann am PCR dìreach a bhios gu dìreach a’ cleachdadh stuthan beathach no planntrais airson leudachadh às aonais às-tharraing searbhag niuclasach.Ann an iomadh dòigh, bidh PCR dìreach ag obair mar PCR cunbhalach

Is e am prìomh eadar-dhealachadh am bufair àbhaisteach a thathas a’ cleachdadh ann am PCR dìreach, faodar an sampall a chuir gu dìreach ris an ath-bhualadh PCR às aonais às-tharraing searbhag niuclasach, ach tha riatanasan co-chosmhail ann airson fulangas nan enzymes agus co-chòrdalachd a’ bhufair a tha an sàs anns an ath-bhualadh dìreach PCR.

Ged a tha barrachd no nas lugha de luchd-bacadh PCR ann an sampallan cumanta, faodaidh PCR dìreach fhathast leudachadh earbsach a choileanadh fo ghnìomhachd enzyman agus bufairean.Feumaidh an ath-bhualadh traidiseanta PCR searbhag niuclasach àrd-inbhe mar theamplaid, a dh’ fhaodadh bacadh a chuir air adhartas rèidh ath-bhualadh PCR ma tha pròtanan agus neo-chunbhalachd eile anns an teamplaid.Tha Direct PCR an-dràsta mar aon de na teicneòlasan as mòr-chòrdte ann an raon breithneachadh moileciuil.

Chaidh 01 Direct PCR a chleachdadh an toiseach airson beathaichean is planntrais

Tha an tagradh as tràithe de PCR dìreach ann an raon bheathaichean is phlanntaichean, leithid fuil, clò agus falt an radan, cat, cearc, coineanach, caoraich, crodh, msaa, duilleagan planntrais agus sìol, msaa, air an cleachdadh airson sgrùdadh genotyping, transgenic, lorg plasmid, mion-sgrùdadh gine, comharrachadh stòr DNA, comharrachadh gnèithean, mion-sgrùdadh SNP agus raointean eile.

Tha cuid de fheartan cumanta aig na h-achaidhean sin, is e sin, tha susbaint gine targaid an ìre mhath àrd agus tha toirt a-mach searbhag niuclasach duilich, agus mar sin chan urrainn dha PCR dìreach ùine a shàbhaladh agus buaidh bheag a thoirt air na toraidhean, ach cuideachd cosgais a shàbhaladh.

Tha PCR dìreach air a chleachdadh airson lorg pathogen na chùis anns na bliadhnachan mu dheireadh, tha cuid de luchd-saothrachaidh ath-bheachdan PCR air mòran oidhirpean a dhèanamh a thaobh seo nuair a tha iad a’ dèanamh ùr-ghnàthachadh.Gu sònraichte anns an tinneas tuiteamach COVID-19 seo, tha mòran de thoraidhean lorgaidh mar sin air nochdadh air a’ mhargaidh, leithid SARS-CoV-2 Kit Lorgaidh Acid Niùclasach (Modh Probe Fluorescent Multiplex PCR) air a sgrùdadh agus air a leasachadh le Foregene, a bhios a’ cleachdadh teicneòlas RT PCR fìor-ùine (rRT-PCR) airson lorg càileachdail de SARS-CoV-2 nasal nasal-acid acid ann an searbhag daonna.

Tha Foregene mar aon de na companaidhean a tha a’ cleachdadh teicneòlas Direct PCR, airson lorg fhaighinn air ORF1ab àbhaisteach, N, E, aguscaochlaideachd sreathan de dh’ aigéid niuclasach ann an sampallan swab nasopharyngeal no oropharyngeal daonna leithid SARS-CoV-2 B.1.1.7 lineage (UK), B.1.351 lineage (ZA), B.1.617 lineage (IND) agus P.1 lineage (BR).

02  Ath-bheachdan a dhìth airson PCR dìreach

Eisimpleir Lysate

Faodar an sampall lysate a rèiteachadh leat fhèin no a cheannach.Bidh an eadar-dhealachadh ann an co-dhèanamh diofar bhrandan de lysate a 'dèanamh an comas lysing eadar-dhealaichte, agus an uairsin bidh an ùine laighe beagan eadar-dhealaichte.Mar eisimpleir, airson ullachadh sampallan clò bheathaichean, thathas a ’moladh lysis 30 mionaid no thar oidhche san fharsaingeachd, agus tha am fuasgladh lysis airson bhìorasan a’ dol bho 3-10 mionaidean.

Prìomh mheasgachadh PCR

Thathas a’ moladh DNA polymerase tòiseachaidh teth a chleachdadh gus leudachadh sònraichte àrdachadh agus comas leudachaidh àrdachadh.Tha cridhe PCR dìreach na polymerase fìor fhulangach.

Cuir às no casg air pàirtean san sampall a bheir buaidh air leudachadh DNA

Às deidh an sampall a bhith air a phròiseasadh leis an lysate, thèid pròtanan, lipids agus sprùilleach cealla eile a leigeil ma sgaoil, cuiridh na stuthan sin bacadh air ath-bhualadh PCR.Mar sin, feumaidh PCR dìreach cuir air falbh no luchd-dìon co-fhreagarrach gus buaidh nam factaran sin a lughdachadh.

03  Cruinneachadh de chòig puingean eòlais de PCR dìreach

An toiseach, tha teicneòlas Direct PCR na theicneòlas PCR dìreach airson diofar shamhlaichean bith-eòlasach.Fon t-suidheachadh theicnigeach seo, chan fheumar an searbhag niuclasach a sgaradh agus a thoirt a-mach, an sampall clò a chleachdadh gu dìreach mar an nì, agus cuir ris na primers gine targaid gus am freagairt PCR a dhèanamh.

San dàrna àite, chan e a-mhàin teicneòlas leudachaidh teamplaid DNA traidiseanta a th’ ann an teicneòlas Direct PCR, ach tha e cuideachd a ’toirt a-steach teamplaid RNA tar-sgrìobhadh cùl PCR.

San treas àite, tha teicneòlas Direct PCR chan ann a-mhàin a’ coileanadh ath-bheachdan càileachdail PCR àbhaisteach air sampallan clò, ach tha e cuideachd a’ toirt a-steach ath-bheachdan qPCR Real-Time, a dh’ fheumas comas eadar-aghaidh fluorescence làidir an-aghaidh cùl-raon a bhith aig an t-siostam ath-bhualadh agus cuir às don chomas antagonistic.

An ceathramh, chan fheum na sampallan a tha air an cuimseachadh leis an teicneòlas Direct PCR ach teamplaidean searbhag niuclasach a leigeil ma sgaoil, agus chan eil iad a’ toirt air falbh pròtanan, polysaccharides, ions salainn, msaa a chuireas bacadh air freagairt PCR.A dh ’fheumas a bhith aig an searbhag niuclasach polymerase agus PCR Mix anns an t-siostam ath-bhualadh gus dèanamh cinnteach à gnìomhachd enzyme agus ath-riochdachadh mionaideachd fo chumhachan iom-fhillte.

Còigeamh, tha an sampall clò air a chuimseachadh le teicneòlas Direct PCR às aonais làimhseachadh beairteachadh searbhag niuclasach agus an ìre de theamplaid glè bheag, a dh’ fheumas cugallachd fìor àrd agus èifeachdas leudachaidh a bhith aig an t-siostam ath-bhualadh.