Ro-ràdh:

Tha RNA, ainm saidheansail searbhag ribonucleic, a ghiorrachadh a ’tighinn bho RiboNucleic Acid, na sheòrsa de dh’ searbhag niuclasach a chaidh a chruthachadh le bhith a’ ceangal co-dhiù dusanan de ribonucleotides tro bannan phosphodiester.

Is e am bun-stèidh airson a bhith a’ sgrùdadh RNA RNA Iomlan gun truailleadh a thoirt a-mach, agus faodar geàrr-chunntas a dhèanamh air prionnsapal bunaiteach às-tharraing RNA mar a leanas:

1. Cuir dragh air na ceallan an toiseach

2. An uairsin cuir às do neo-chunbhalachd macromolecular (pròtainean, lipids, DNA, msaa).

3. Mu dheireadh, tha an RNA air a dhòrtadh fhad 'sa tha e a' toirt air falbh salainn agus solventan organach, agus a 'glanadh an RNA tuilleadh

Modh às-tharraing an-dè agus an-diugh

Is e a ’chiad ghinealach de dhòigh às-tharraing RNA an dòigh sileadh TRIzol (tha ath-bheachdan a thathas a’ cleachdadh a ’toirt a-steach guanidine isothiocyanate, phenol, cloroform, msaa) a chaidh a chruthachadh le seanair leis an t-ainm Piotr Chomczynski agus seanair Nicoletta Sacchi, leis gu bheil an innleachd seo a’ ceadachadh às-tharraing RNA luath agus furasta, bhon uairsin thòisich àrdachadh ann an rannsachadh RNA.

Nas fhaide air adhart, reic Grandpa am peutant seo ri Invitrogen, agus bhrosnaich Invitrogen an dòigh seo don t-saoghal agus thàinig e gu bhith na dhòigh air a chleachdadh gu farsaing.

Nas fhaide air adhart, chaidh Invitrogen fhaighinn le Thermo!

Toradh riochdachail: reactant TRIzol aig Invitrogen

Ach, tha dòigh sileadh TRIzol a’ feumachdainn ioma-sileadh agus toirt a-mach RNA, agus tha na h-ath-bheachdan a thathar a’ cleachdadh puinnseanta agus bheir iad ùine mhòr airson obrachadh.

Mar sin, thàinig an dòigh glanaidh colbh-enzyme san dàrna ginealach gu bith, a’ cleachdadh ball silica gel mar stuth sùghaidh searbhag niuclasach sònraichte gus faighinn air ais RNA san sampall as fheàrr fhad ‘s a tha e a’ toirt air falbh neo-chunbhalachd eile.

Bidh an dòigh dàrna ginealach a ’sìmpleachadh an obrachaidh air bunait coileanadh seasmhach, a’ lughdachadh am feart cunnairt, agus a ’leasachadh èifeachdas às-tharraing RNA.

Bathar riochdachail: QIAGEN RNeasy agus a 'mhòr-chuid de stuthan dachaigheil

Ach, feumaidh an dà chuid dòighean ciad agus dàrna ginealach cleachdadh DNase gus truailleadh DNA a thoirt air falbh, a bheir beagan mì-ghoireasachd do dheuchainnean sìos an abhainn às deidh sin.Lùghdaichidh DNase iarmharach èifeachdas tar-sgrìobhadh cùil agus lughdaichidh e synthesis cDNA a’ chiad dual, agus mar sin a’ toirt buaidh air neo-mhearachdachd nan toraidhean.

Mar sin, tha an dòigh às-tharraing treas ginealach air a bharrrachadh a rèir an dàrna ginealach.Chan fheum an deuchainn enzyman sam bith a chur ris, agus gheibhear RNA gu furasta le dìreach dà cholbh.

Colbh 1: Colbh glanaidh DNA gus DNA a ghlanadh

Colbh 2: Tha Colbh RNA a-mhàin gu sònraichte a’ gabhail ri agus a’ faighinn air ais RNA

Bidh gnìomhachd cho sìmplidh chan ann a-mhàin a ’sàbhaladh ùine, ach cuideachd a’ comasachadh gnìomhachd deuchainnean sìos an abhainn!

Bathar riochdachail: QIAGEN RNeasy Plus agusForegeneBathar sreath purification RNA

（RNeasy Plus）

（Foregene'sLusan Kit Iomallach Iomlan RNA）

Abair thusa gu sàmhach!Bidh pasgan RNA Foregene cuideachd a ’taisbeanadh inneal-brisidh RNase a tha furasta a chleachdadh, a dh’ fhaodas 400μg de RNase a thoirt air falbh gu tur air an uachdar cruaidh ann an 1 mionaid, gun a bhith a ’cur stuthan puinnseanta sam bith ri bodhaig an duine!

Dealbh1: Clàr coimeas pròiseas obrachaidh

Faodaidh toraidhean Foregene às-tharraing RNA a chrìochnachadh ann an dìreach dà òran, na cuir feadhainn eile farmad ris an adhartas deuchainn agad!

Dealbh2:Etoraidhean deuchainneach clàr coimeas

A’ chiad ghinealach (1: TRIzol)

An dàrna ginealach (2: RNeasy of QIAGEN)

An treas ginealach (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Dealbh3: graf qPCR (graf lùb leudachaidh)

A 'chiad ghinealach (uaine a' ciallachadh TRIzol -, dearg a 'ciallachadh TRIzol +)

Tha an dàrna ginealach (adhar gorm a’ ciallachadh QIAGEN RNeasy-, dearg a’ ciallachadh QIAGEN RNeasy +)

An treas ginealach (gorm a’ ciallachadh QIAGEN RNeasy plus, uaine a’ ciallachadh Foregene)

(Nòta: tha graf qPCR “-” a’ nochdadh nach deach DNase a chur ris agus nach deach truailleadh DNA a thoirt air falbh. Mar sin, tha an CT nas àirde agus chan eil an toradh ceart; Tha “+” a’ nochdadh gun deach DNase a chur ris agus gun deach an truailleadh DNA a thoirt air falbh, tha an toradh ceart)

Tha gach ùrachadh teignigeach a’ ciallachadh gu bheil gnìomhachd an deuchainn a’ leasachadh ann an stiùireadh nas sìmplidhe agus nas fhasa a chleachdadh.

Tha Foregene ag amas air barrachd luchd-rannsachaidh saidheansail a chuideachadh gus ùine deuchainneach agus cosgais a shàbhaladh, toraidhean deuchainneach àrd-inbhe fhaighinn, agus coileanadh rannsachaidh saidheansail nas luachmhoire a chruthachadh còmhla.