Tha grunn innleachdan rèabhlaideach ann an eachdraidh teicneòlas lorg nam inntinn mar theicneòlas immunolabeling stèidhichte air prionnsapal ceangal sònraichte antigen-antibody, teicneòlas PCR agus teicneòlas sreathachaidh.An-diugh bruidhnidh sinn mu theicneòlas PCR.A rèir mean-fhàs teicneòlas PCR, bidh daoine mar as trice a’ roinn teicneòlas PCR ann an trì ginealaichean: teicneòlas PCR àbhaisteach, teicneòlas PCR cainneachdail fìor-ùine agus teicneòlas PCR didseatach.
Cinnleachd PCR ommon
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
Dh'innlich Kary Mullis am freagairt slabhraidh polymerase (freagairt slabhraidh polymerase, PCR) ann an 1983. Thathas ag ràdh, nuair a bha e a 'dràibheadh a leannan, gu h-obann bha spionnadh brosnachaidh aige agus smaoinich e air prionnsabal PCR (air na buannachdan bho bhith a' dràibheadh).Fhuair Kary Mullis an Duais Nobel ann an Ceimigeachd ann an 1993. Thuirt an New York Times: “Gu math tùsail agus cudromach, cha mhòr a’ roinn bith-eòlas ann an amannan ro-PCR agus an dèidh PCR.
Prionnsabal PCR: Fo catalysis DNA polymerase, thathas a’ cleachdadh an dualan màthair DNA mar theamplaid, agus tha am primer sònraichte air a chleachdadh mar thoiseach tòiseachaidh an leudachaidh, agus tha an dualan nighean DNA a’ cur ri teamplaid dualan na màthar DNA air a chopaigeadh in vitro tro dhì-nàdurachadh, annealing, leudachadh agus ceumannan eile.Is e teicneòlas leudachaidh DNA synthesis in vitro a th’ ann, as urrainn àrdachadh gu luath agus gu sònraichte air targaid DNA in vitro.
Buannachdan PCR àbhaisteach
1.Modh clasaigeach, coileanta inbhean eadar-nàiseanta agus dachaigheil
2.Cosgais nas ìsle de ath-bheachdan ionnstramaid
3.Faodar toraidhean PCR fhaighinn air ais airson deuchainnean bith-eòlas moileciuil eile
Inneal Foregene PCR air a mholadh: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Bathar co-cheangailte: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Eas-bhuannachdan PCR àbhaisteach
1.furasta a thruailleadh
2.obrachadh doirbh
3.mion-sgrùdadh càileachdail a-mhàin
4.Cugallachd meadhanach
5.Tha leudachadh neo-shònraichte ann, agus nuair a tha an còmhlan neo-shònraichte an aon mheud ris a’ chòmhlan targaid, chan urrainnear a chomharrachadh
CPCR stèidhichte air electrophoresis apillary
Mar fhreagairt air easbhaidhean PCR àbhaisteach, tha cuid de luchd-saothrachaidh air ionnstramaidean a thoirt a-steach stèidhichte air prionnsapal electrophoresis capillary.Tha an ceum electrophoresis às deidh leudachadh PCR air a chrìochnachadh anns an capillary.Tha an cugallachd nas àirde, agus faodar eadar-dhealachadh grunn bhunaitean a chomharrachadh agus faodar an leudachadh a thomhas le MAERKER.susbaint toraidh.Is e an ana-cothrom gu bheil feum fhathast air an toradh PCR fhosgladh agus a chuir a-steach don ionnstramaid, agus tha cunnart mòr ann fhathast truailleadh.
CapillaryElectrophoresis
2. Teicneòlas cainneachdail fìor-ùine PCR (Cainneachdail fìor-ùine PCR, qPCR)Tha PCR cainneachdail fluorescent, ris an canar cuideachd Real-Time PCR, na theicneòlas cainneachdail searbhag niuclasach ùr a chaidh a leasachadh le PE (Perkin Elmer) ann an 1995. Tha eachdraidh leasachaidh PCR cainneachdail fluaraiseach na eachdraidh de spàirn fuamhairean leithid ABI, Roche, agus Bio-Rad a tha a’ gluasad anam.Ma tha ùidh agad, faodaidh tu sgrùdadh a dhèanamh air.Is e an dòigh seo an-dràsta an dòigh PCR leth-cainneachdail as aibidh agus as fharsainge.
Inneal qPCR air a mholadh: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Modh dath flùraiseach (SYBR Green I):Is e SYBR Green I an dath ceangail DNA as cumanta airson PCR cainneachdail, a tha a’ ceangal gu neo-shònraichte ri DNA dà-shreath.Anns an stàit shaor, bidh SYBR Green a 'toirt a-mach fluorescence lag, ach aon uair' s gu bheil e ceangailte ri DNA dà-fhillte, bidh an fhuaim-fhuaimneach a 'meudachadh 1000-fhillte.Mar sin, tha an comharra flùraiseach iomlan a thèid a sgaoileadh le ath-bhualadh co-rèireach ris an ìre de DNA dà-shreath a tha an làthair agus àrdaichidh e le àrdachadh ann an toradh meudaichte.Leis gu bheil an dath a’ ceangal gu neo-shònraichte ri DNA dà-shreath, faodar toraidhean dearbhach meallta a chruthachadh.
Bathar co-cheangailte: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Modh dearbhaidh flùraiseach (teicneòlas Taqman): RèMeudachadh PCR, thèid probe flùraiseach sònraichte a chur ris aig an aon àm ri paidhir de phrìomhairean.Is e oligonucleotide sreathach a th’ anns an probe, le buidheann luchd-aithris flùraiseach agus buidheann quencher flùraiseach fa leth air an ainmeachadh aig gach ceann.Nuair a tha an probe slàn, tha an comharra flùraiseach a thèid a sgaoileadh leis a’ bhuidheann neach-aithris air a ghabhail a-steach leis a’ bhuidheann quencher, agus an lorg Chan eil comharra flùraiseach ann;rè leudachadh PCR (anns an ìre leudachaidh), bidh gnìomhachd Dicer 5'-3 'de enzyme Taq a’ cnàmhadh agus a ’lughdachadh an probe, gus am bi a’ bhuidheann fluorescent neach-aithris agus a ’bhuidheann fluorescent quencher air an sgaradh, gus am bi an siostam sgrùdaidh fluorescence Faodar an comharra flùraiseach fhaighinn, is e sin, a h-uile uair a thèid slabhraidh DNA àrdachadh, is e sioncranachadh fluorescent iomlan a th’ ann an sioncranachadh fluorescent a tha air a chruthachadh. s agus cruthachadh thoraidhean PCR.Is e modh dearbhaidh Taqman an dòigh lorgaidh as cumanta ann an lorg clionaigeach.
Bathar co-cheangailte: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Buannachdan qPCR
1.Tha an dòigh aibidh agus tha an uidheamachd taice agus ath-bheachdan coileanta
2.Cosgais meadhanach reagents
3.furasta a chleachdadh
4.Cugallachd lorg àrd agus sònrachas
Eas-bhuannachdan qPCR
Bidh mùthadh a’ ghine targaid a’ leantainn gu lorg air chall.
Chan urrainnear toradh lorg teamplaid dùmhlachd ìosal a dhearbhadh.
Tha mearachd mòr ann nuair a thathar a’ cleachdadh an lùb àbhaisteach airson lorg cainneachdail.
3. Teicneòlas didseatach PCR (PCR didseatach, dPCR).
Tha PCR didseatach na dhòigh air tomhas iomlan de mholacilean searbhag niuclasach.An coimeas ri qPCR, faodaidh PCR didseatach an àireamh de mholacilean DNA / RNA a leughadh gu dìreach, is e sin an àireamhachadh iomlan de mholacilean searbhag niuclasach anns an sampall tòiseachaidh.Ann an 1999, mhol Bert Vogelstein agus Coinneach W. Kin-zler bun-bheachd dPCR gu foirmeil.
Ann an 2006, b’ e Fluidigm a’ chiad fhear a rinn ionnstramaid dPCR malairteach stèidhichte air sliseag.Ann an 2009, chuir Life Technologies na siostaman OpenArray agus QuantStudio 12K Flex dPCR air bhog.Ann an 2013, chuir Life Technologies an siostam QuantStudio 3DdPCR air bhog, a bhios a’ cleachdadh teicneòlas chip microfluidic nanoscale àrd-dùmhlachd gus sampallan a sgaoileadh gu 20,000 cealla fa leth.anns an fhreagairt gu math.
Ann an 2011, chuir Bio-Rad an ionnstramaid QX100 dPCR stèidhichte air droplet air bhog, a bhios a’ cleachdadh teicneòlas uisge-ann-ola gus an sampall a sgaoileadh gu cothromach gu 20,000 droplet-uisge-ola, agus a’ cleachdadh anailisiche droplet gus na boinneagan a sgrùdadh.Ann an 2012, chuir RainDance an ionnstramaid RainDrop dPCR air bhog, air a stiùireadh le gas le cuideam àrd, gus gach siostam ath-bhualadh àbhaisteach a roinn ann an emulsion ath-bhualadh anns a bheil 1 millean gu 10 millean meanbh-bhuille aig ìre picoliter.
Gu ruige seo, tha PCR didseatach air dà phrìomh bhuidheann a chruthachadh, seòrsa chip agus seòrsa droplet.Ge bith dè an seòrsa PCR didseatach, tha na prìomh phrionnsapalan aige a’ cuingealachadh caolachadh, endpoint PCR agus cuairteachadh Poisson.Tha an siostam ath-bhualadh PCR àbhaisteach anns a bheil teamplaidean searbhag niuclasach air a roinn gu cothromach ann an deichean de mhìltean de ath-bheachdan PCR, a tha air an cuairteachadh gu chips no microdroplets, gus am bi uiread de mholacile teamplaid anns gach freagairt, agus bithear a’ coileanadh freagairt teamplaid PCR aon-mholacileach.Le bhith a’ leughadh an fhluorescence Tha làthaireachd no neo-làthaireachd a’ chomharra air a chunntadh, agus tha an tomhas iomlan air a dhèanamh às deidh calibration cuairteachadh Poisson staitistigeil.
Is iad na leanas feartan grunn àrd-ùrlaran PCR didseatach a chleachd mi:
1. Bio-Rad QX200 droplet didseatach PCR Bio-RadTha QX200 na àrd-ùrlar PCR didseatach gu math clasaigeach, am pròiseas lorgaidh bunaiteach: tha 20,000 sampall air an gineadh leis a’ ghineadair droplet Tha meanbh-bhuillean uisge-ann-ola air an leudachadh air inneal PCR àbhaisteach, agus mu dheireadh tha comharra flùraiseachd gach meanbh-bhuille air a leughadh le leughadair meanbh-bhuille.Tha an obrachadh nas iom-fhillte, agus tha cunnart truailleadh meadhanach.
Xinyi TD1 micro-droplet PCR didseatachTha Xinyi TD1 na àrd-ùrlar PCR didseatach dachaigheil, am pròiseas lorgaidh bunaiteach: cruthaich 30,000-50,000 boinneagan uisge-ann-ola tro ghineadair droplet, leudaich air ionnstramaid PCR cumanta, agus mu dheireadh cuir seachad an leughadair droplet a’ leughadh comharra flùraiseach gach droplet.Tha an dà chuid gineadh droplet agus leughadh san àrd-ùrlar seo air an coileanadh ann an sliseag coisrigte le cunnart ìosal de thruailleadh.
STILLA Naica micro-droplet chip didseatach PCRTha STILLA Naica na àrd-ùrlar PCR didseatach an ìre mhath ùr.Is e am pròiseas lorgaidh bunaiteach: cuir am fuasgladh ath-bhualadh ris a’ chip, cuir a’ chip a-steach don t-siostam gineadh agus leudachaidh micro-droplet, agus cruthaich 30,000 meanbh-bhuille.Sgaoileadh air a’ chip, agus tha leudachadh PCR air a chrìochnachadh air a’ chip.An uairsin thèid a’ chip leudaichte a ghluasad chun t-siostam sgrùdaidh leughaidh meanbh-droplet, agus tha an comharra flùraiseach air a leughadh le bhith a’ togail dhealbhan.Leis gu bheil am pròiseas gu lèir a’ tachairt ann an sgiob dùinte, tha an cunnart truailleadh ìosal.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D didseatach chip PCR
Tha ThermoFisher QuantStudio 3D na àrd-ùrlar PCR didseatach clasaigeach eile stèidhichte air chip.Is e am pròiseas lorgaidh bunaiteach aige: cuir am fuasgladh ath-bhualadh a-steach don spreader, agus sgaoil am fuasgladh ath-bhualadh gu cothromach air a’ chip le 20,000 microwells tron spreader., cuir a’ chip air an inneal PCR gus àrdachadh, agus mu dheireadh cuir a’ chip a-steach don leughadair agus gabh dealbh gus an comharra flùraiseach a leughadh.Tha an obrachadh gu math toinnte, agus tha am pròiseas gu lèir air a dhèanamh ann an sgiob dùinte, agus tha an cunnart truailleadh ìosal.
5. JN MEDSYS Clarity chip didseatach PCR
Tha JN MEDSYS Soilleireachd na àrd-ùrlar PCR didseatach coltach ri chip.Is e am pròiseas lorgaidh bunaiteach aige: cuir am fuasgladh ath-bhualadh a-steach don applicator, agus sgaoil am fuasgladh freagairt gu cothromach air tiùban 10,000 PCR a tha suidhichte anns an tiùb PCR tron tagradh.Air a ’chip microporous, bidh am fuasgladh ath-bhualadh a’ dol a-steach don chip tro ghnìomhachd capillary, agus tha an tiùb PCR leis a ’chip air a chuir air an inneal PCR airson leudachadh, agus mu dheireadh thèid a’ chip a chuir a-steach don leughadair gus an comharra flùraiseach a leughadh le bhith a ’togail dealbh.Tha an obrachadh nas iom-fhillte.Tha an cunnart bho thruailleadh ìosal.
Tha geàrr-chunntas air crìochan gach àrd-ùrlar PCR didseatach mar a leanas:
Is e comharran measaidh an àrd-ùrlar PCR didseatach: an àireamh de dh'aonadan sgoltadh, an àireamh de shianalan flùraiseach, iom-fhillteachd obrachaidh agus cunnart truailleadh.Ach is e an rud as cudromaiche cruinneas an lorg.Is e aon dòigh air àrd-ùrlaran PCR didseatach a mheasadh a bhith a’ cleachdadh grunn àrd-ùrlaran PCR didseatach gus dearbhadh a dhèanamh air a chèile, agus is e dòigh eile stuthan àbhaisteach a chleachdadh le luachan ceart.
Buannachdan dPCR
1.A’ coileanadh àireamhachadh iomlan
2.Cugallachd nas àirde agus sònrachas
3.Is urrainn dha sampallan leth-bhreac ìosal a lorg
Eas-bhuannachdan dPCR1. Uidheam daor agus ath-bheachdan 2. Obrachadh toinnte agus ùine lorg fada 3. Raon lorgaidh cumhang
Aig an àm seo, tha na buannachdan agus na h-eas-bhuannachdan aca fhèin aig na trì ginealaichean de theicneòlas PCR, agus tha na raointean tagraidh aca fhèin aig gach fear, agus chan e dàimh a th ’ann gu bheil aon ghinealach a’ dol an àite an tè eile.Tha adhartas leantainneach teicneòlais air spionnadh ùr a thoirt a-steach do theicneòlas PCR, a’ toirt cothrom dha aon taobh tagraidh fhuasgladh às deidh a chèile, a’ dèanamh lorg searbhag niuclasach nas goireasaiche agus nas cruinne.
Stòr: Bidh an Dr Yuan gad thoirt airson deuchainn
Bathar air a mholadh:
Ùine puist: Samhain-18-2022
