Is e a bhith a’ dearbhadh coileanadh primers agus probes aig ìre thràth de ath-bheachdan PCR agus a ’dearbhadh na suidheachaidhean freagairt as freagarraiche na ro-ghoireasan gus dèanamh cinnteach à adhartas rèidh de dheuchainnean foirmeil.
Mar sin ciamar a dh’ fheumas sinn an probe primer a dhearbhadh aig ìre thràth?
Is e na prìomh chomharran bun-loidhne, lùb leudachaidh, luach ct, èifeachdas leudachaidh, lorg sampall dùmhlachd ìosal, CV, msaa.
Bun-loidhne
Is e a’ bhun-loidhne an loidhne chòmhnard ann an lùb leudachaidh PCR.Anns a 'chiad beagan chuairtean de fhreagairt leudachaidh PCR, chan eil an comharra flùraiseach ag atharrachadh mòran agus bidh e na loidhne dhìreach.Is e an loidhne dhìreach seo am bun-loidhne.
Nuair a bhios tu a’ sgrìonadh probes PCR primer, thoir an aire a bheil a’ bhun-loidhne ìre.Bheir purrachd dùmhlachd probe primer buaidh air a ’bhun-loidhne, mar a bhith ag adhbhrachadh gum bi a’ bhun-loidhne ag èirigh no a ’tuiteam.Tha am bun-loidhne cuideachd na chomharradh gu math intuitive.
Curve Amplification
Is e comharra intuitive eile cumadh an lùb leudachaidh.Tha e nas fheàrr lùb cumadh S a bhith agad gus leudachadh àrd-sgoile no lùban leudachaidh neo-àbhaisteach eile a sheachnadh.
Luach Ct
Is e luach Ct an àireamh de chuairtean a tha co-chosmhail ris a’ phuing tionndaidh bhon bhun-loidhne chun fhàs eas-chruthach.
Airson an aon shampall, bidh diofar probes primer a’ leantainn gu lùban leudachaidh eadar-dhealaichte, agus bheir èifeachdas leudachaidh agus ìre eadar-theachd buaidh air an luach Ct co-fhreagarrach.Ann an teòiridh, mar as lugha luach Ct an probe primer a thaghas sinn, ’s ann as fheàrr.
Èifeachdas Meudachaidh
Is e aon de na dòighean as earbsaiche agus as seasmhaiche airson èifeachdas àrdachadh PCR a mheasadh an lùb àbhaisteach, a tha cuideachd air aithneachadh gu farsaing le luchd-rannsachaidh.Tha an dòigh a’ toirt a-steach sreath de shamhlaichean a dhèanamh gus smachd a chumail air an àireamh coimeasach de theamplaidean targaid.Mar as trice bidh na sampallan sin air an dèanamh le lagachadh sreathach de fhuasglaidhean stoc dùmhail, is e caolachadh 10-fhillte am fear as cumanta a thathas a’ cleachdadh.A’ cleachdadh sreath de shamhlaichean caolaichte, a’ cleachdadh prògram àbhaisteach qPCR gus àrdachadh gus an luach Cq fhaighinn, agus mu dheireadh tarraing lùb àbhaisteach a rèir dùmhlachd gach sampall agus an luach Cq co-fhreagarrach gus an co-aontar sreathach Cq = -klgX0 + b, agus an èifeachdas leudachaidh E = 10 (-1 / k) -1 fhaighinn.Nuair a bhios tu a’ cleachdadh qPCR airson mion-sgrùdadh cainneachdail, feumaidh an èifeachdas leudachaidh a bhith anns an raon de 90% -110% (3.6>k> 3.1).
Dearbhadh sampaill dùmhlachd ìosal
Nuair a tha an dùmhlachd sampall ìosal, tha ìrean lorgaidh diofar probes primer eadar-dhealaichte.Bidh sinn a’ taghadh 20 sampall le dùmhlachd ìosal airson ath-riochdachadh, agus is e an siostam primer-probe leis an ìre lorgaidh as àirde as fheàrr.
Coefficient of Variation (CV)
Faodar 10 sampallan dùblaichte a lorg le diofar probes primer a rèir inbhe loidhne an ath-ghnìomhach airson lorg meudachaidh searbhag niuclasach.
Ath-bheachdan àireamhach:
Cruinneas
Bu chòir cruinneas taobh a-staigh aon bhaidse coinneachadh: is e an co-èifeachd atharrachaidh (CV,%) de luach logarithmach an dùmhlachd deuchainn ≤5%.Nuair a tha an dùmhlachd sampall ìosal, is e an co-èifeachd atharrachaidh (CV,%) de logarithm an dùmhlachd lorgaidh ≤10%
Ath-bheachdan càileachdail:
Cruinneas
Bu chòir an cruinneas taobh a-staigh aon bhaidse coinneachadh:
(1) Co-èifeachd atharrachaidh luach Ct (CV,%) ≤5%
Tha an aon shampall air a dhearbhadh aig an aon àm airson 10 tursan, agus bu chòir toraidhean an deuchainn a bhith cunbhalach
Ùine puist: Sultain 18-2021
