Gun chomharran leudachaidh

1.Tha an Taq DNA Polymerase anns a’ phut a’ call a ghnìomhachd air sgàth stòradh neo-iomchaidh no an uidheamachd a’ tighinn gu crìch.
Moladh: Dearbhaich suidheachadh stòraidh a’ phiseag;ath-chuir tomhas iomchaidh de Taq DNA Polymerase ris an t-siostam PCR no ceannaich Kit PCR Real Time ùr airson deuchainnean co-cheangailte.

2.Tha tòrr luchd-bacadh Taq DNA Polymerase anns an teamplaid DNA.
Moladh: Ath-ghlan an teamplaid no lughdaich an àireamh de theamplaid a thathar a’ cleachdadh.

Chan eil dùmhlachd 3.The Mg2+ freagarrach.
Moladh: Is e an dùmhlachd Mg2+ den 2 × Real PCR Mix a bheir sinn seachad 3.5mM.Ach, airson cuid de phrìomhairean agus teamplaidean sònraichte, is dòcha gum bi an dùmhlachd Mg2 + nas àirde.Mar sin, faodaidh tu MgCl2 a chuir ris gu dìreach gus an dùmhlachd Mg2+ a mheudachadh.Thathas a’ moladh an Mg2+ 0.5mM àrdachadh gach uair airson optimization.

4. Chan eil na suidheachaidhean leudachaidh PCR freagarrach, agus tha an t-sreath primer no an dùmhlachd neo-iomchaidh.
Moladh: dearbhaich dè cho ceart ‘s a tha an t-sreath primer agus nach eil am primer air a dhol sìos;mura h-eil an comharra leudachaidh math, feuch ris an teòthachd annealing ìsleachadh agus atharraich an dùmhlachd primer gu h-iomchaidh.

5.Tha an tomhas teamplaid ro bheag no cus.
Moladh: Dèan caolachadh caisead sreathach teamplaid, agus tagh dùmhlachd an teamplaid leis a’ bhuaidh PCR as fheàrr airson deuchainn PCR Real Time.

Tha luach fluorescence ro àrd aig NTC

1.Reagent truailleadh adhbhrachadh rè obrachadh.
Moladh: Cuir ath-bheachdan ùra nan àite airson deuchainnean PCR Real Time.

2.Contamination thachair rè ullachadh an PCR reaction siostam.
Moladh: Gabh ceumannan dìon riatanach rè obrachadh, leithid: caitheamh mhiotagan latex, cleachdadh tip pìobaireachd le sìoltachan, msaa.

3.Tha na primers air an lughdachadh, agus bidh truailleadh na primers ag adhbhrachadh leudachadh neo-shònraichte.
Moladh: Cleachd electrophoresis SDS-PAGE gus faighinn a-mach a bheil na primers air an lughdachadh, agus cuir primers ùra nan àite airson deuchainnean PCR Real Time.

Primer dimer no leudachadh neo-shònraichte

Chan eil dùmhlachd 1.The Mg2+ freagarrach.
Moladh: Is e an dùmhlachd Mg2+ den 2 × Real PCR EasyTM Mix a bheir sinn seachad 3.5 mM.Ach, airson cuid de phrìomhairean agus teamplaidean sònraichte, is dòcha gum bi an dùmhlachd Mg2 + nas àirde.Mar sin, faodaidh tu MgCl2 a chuir ris gu dìreach gus an dùmhlachd Mg2+ a mheudachadh.Thathas a’ moladh an Mg2+ 0.5mM àrdachadh gach uair airson optimization.

2.The PCR annealing teòthachd ro ìosal.
Moladh: Àrdaich an teòthachd annealing PCR le 1 ℃ no 2 ℃ gach turas.

3.Tha toradh PCR ro fhada.
Moladh: Bu chòir fad an toraidh PCR Real Time a bhith eadar 100-150bp, gun a bhith nas fhaide na 500bp.

4.Tha na primers air an lughdachadh, agus mar thoradh air truailleadh na primers bidh coltas leudachadh sònraichte.
Moladh: Cleachd electrophoresis SDS-PAGE gus faighinn a-mach a bheil na primers air an lughdachadh, agus cuir primers ùra nan àite airson deuchainnean PCR Real Time.

5.Tha siostam PCR neo-iomchaidh, no tha an siostam ro bheag.
Moladh: Tha an siostam ath-bhualadh PCR ro bheag ag adhbhrachadh gun lùghdaich cruinneas an lorg.Tha e nas fheàrr an siostam ath-bhualadh a tha air a mholadh leis an ionnstramaid PCR cainneachdail a chleachdadh gus an deuchainn PCR Real Time ath-ruith.

Ath-aithris truagh de luachan cainneachdail

1.The ionnstramaid tha malfunctioning.
Moladh: Dh’ fhaodadh gu bheil mearachdan ann eadar gach toll PCR den ionnstramaid, a’ leantainn gu droch ath-riochdachadh rè riaghladh teothachd no lorg.Feuch an toir thu sùil a rèir stiùireadh an ionnstramaid fhreagarrach.

2.The purity sampall chan eil e math.
Moladh: Leanaidh sampallan neo-ghlan gu droch ath-riochdachadh den deuchainn, a tha a ’toirt a-steach purrachd an teamplaid agus na primers.Tha e nas fheàrr an teamplaid ath-nuadhachadh, agus is fheàrr na primers a ghlanadh le SDS-PAGE.

3.Tha ullachadh siostam PCR agus ùine stòraidh ro fhada.
Moladh: Cleachd an siostam PCR Real Time airson deuchainn PCR dìreach às deidh an ullachadh, agus na fàg e gu aon taobh ro fhada.

4. Chan eil na suidheachaidhean leudachaidh PCR freagarrach, agus tha an t-sreath primer no an dùmhlachd neo-iomchaidh.
Moladh: dearbhaich dè cho ceart ‘s a tha an t-sreath primer agus nach eil am primer air a dhol sìos;mura h-eil an comharra leudachaidh math, feuch ris an teòthachd annealing ìsleachadh agus atharraich an dùmhlachd primer gu h-iomchaidh.

5.Tha siostam PCR neo-iomchaidh, no tha an siostam ro bheag.
Moladh: Tha an siostam ath-bhualadh PCR ro bheag ag adhbhrachadh gun lùghdaich cruinneas an lorg.Tha e nas fheàrr an siostam ath-bhualadh a tha air a mholadh leis an ionnstramaid PCR cainneachdail a chleachdadh gus an deuchainn PCR Real Time ath-ruith.